酶联免疫法与冷凝集试验在小儿支原体肺炎感染诊断中的应用价值分析(2)
Key words：Mycoplasma pneumoniae infection in children；Enzyme-linked immunosorbent assay；Condensate agglutination test
支原体肺炎(mycoplasma pneumonia，MP)是引起哮喘、支气管炎及呼吸道感染等疾病常见的病原体，支原体介于病毒与细菌之间，主要生长于呼吸道上皮细胞中且可自主繁殖，可损伤细胞膜，对纤毛运动起到一定的抑制作用，最终引起感染[1]。近年来小儿支原体肺炎感染患病率呈逐年上升趋势发展，且多见于儿童，起病较缓慢，病程持续时间长短不一，临床症状表现为咳嗽、发烧等，由于与其他肺部感染症状较为相似，故容易出现漏诊或误诊。若患儿不及时治疗，可引起多器官功能障碍，严重时可致死[2]。因此，寻求一种高效的诊断方式来提高疾病检出率，对改善患儿生存质量，降低病死率均有重要意义[3]。既往临床通常采用以支原体培养为诊断“金标准”，但其操作方式较为复杂且检测所需时间较长，部分医院难以开展，因此寻求一种操作方便、高效的检测方式尤为重要[4]。本研究选取我院2015年3月～2017年3月收治的100例支气管肺炎患儿为研究对象，分别采用酶联免疫法及冷凝集试验检测血清肺炎支原体抗体IgM(MP-IgM)水平，进一步探究酶联免疫法与冷凝集试验在小儿支原体肺炎感染诊断中的应用价值，旨在为临床诊断疾病提供方法和经验，现报道如下。
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1 资料与方法
1.1 一般资料 选取我院2015年3月～2017年3月收治的支气管肺炎患儿100例，其中男性53例，女性47例；年龄2～13岁，平均年龄(6.12±2.15)岁；其中2～5岁48例，6～13岁52例。本研究经本院伦理委员会批准通过。纳入标准：①临床均有发热、食欲下降、呼吸困难、刺激性咳嗽等症状，肺部X线检查可见絮状阴影；②患儿家属对研究内容知情，并签署知情同意书。排除标准：①患儿合并先天性心、肾、肝等脏器器官疾病；②其他病因导致的肺炎感染。
1.2 方法 患儿均同时进行支原体分离培养：采取患儿痰液、鼻咽下拭子或支气管分泌物，将其放置培养基中，含有足量的新鲜酵母及血清浸出液，将其放置于37 ℃环境下培养5 d后，观察记录菌落。采取所有患儿清晨空腹静脉血3 ml，以3500 r/min离心15 min后取血清，将其放置在-20 ℃冰箱内冷藏备测，采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测血清支原体抗体(MP-IgM)水平，试剂盒由深圳安群生物技术有限公司提供，操作过程严格遵守试剂盒操作说明，当滴度>1：80则为阳性。此外，采用冷凝集试验血清MP-IgM水平，将致敏离子和未致敏粒子加入血清中，将其充分摇匀后，采用深圳安群生物技术有限公司提供的配套试剂盒检测MP-IgM水平，操作过程严格遵守试剂盒操作说明，当滴度≥1：64时，则为阳性。
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1.3观察指标 记录两种检测方法阳性、阴性检出率，以支原体培养为诊断“金标准”分析两种检测方式的特异性、灵敏性、准确率、阳性预测值进行评估。
1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件，计数资料以[n(%)]表示，组间比较采用？字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
酶联免疫法特异性90.75%较冷凝集试验高，误诊率为9.26%较冷凝集试验29.63%低，差异具有统计学意义(P<0.05)；酶联免疫法敏感性84.78%略低于冷凝集试验97.83%，准确度88.00%，漏诊率15.22%，略高于冷凝集试验准确度83.00%，漏诊率2.17%，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1、表2。
3讨论
肺炎支原体是诱发支原体肺炎感染的关键病毒，是一种独立存活在细胞外的最小微生物，临床发病机制尚未完全表达清楚[5]。小儿肺炎支原体感染具有较高的患病率，早期病情较为隐匿，且临床症状缺乏特异性，进而增加疾病误诊及漏诊率[6]。此外，还可导致临床抗生素的滥用、错用，加之病情反复发作，引发患儿免疫系统、中枢神经系统等并发症，严重危害患儿生长发育[7]。因此早期诊断疾病，并给予其相应的治疗对提高患儿生存质量具有重要意义[8]。
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目前临床诊断疾病的方法较多，包括酶联免疫法、冷凝集试验、支原体培养、免疫荧光法等，其中支原体培养被临床视为诊断小儿肺炎支原体感染“金标准”，临床虽具有较高的检出率，但其实验难度较大，操作过程繁杂且检测时间较长，不能快速的得出检测结果，且部分医院难以实行，故而临床推广难度较大[9]。因此采用高效、操作方便、快速准确的诊断方式对临床治疗尤为重要。近年来随着临床不断的研究，发现血清抗MP-IgM是患儿发病后机体内出现最早的特异性抗体，发病1周后出现，且在3～4周内可达到最高峰，由于早期病情较为隐匿，当患儿到院就诊时绝大多数患儿体内已出现血清抗MP-IgM，因此早期检测MP-IgM对疾病的检出率尤为重要。临床将冷凝集试验视为检测肺炎支原体感染一种传统辅助检测方式之一，具有较高的敏感性且漏诊率较低，但临床诊断过程中往往被误诊为其他病原体感染，因此单独采用冷凝集试验易增加疾病误诊率。酶联免疫法是临床辅助检查另一重要检测方式，不受患儿自身免疫应答影响，具有较高的特异性，且误诊率较低，被临床广泛应用。两种检测方式操作均较为简便，且检测结果较快，可为临床治疗争取更多时间。本研究结果显示，酶联免疫法特异性90.75%较冷凝集试验高，误诊率为9.26%较冷凝集试验29.63%低，差异具有统计学意义(P<0.05)；酶联免疫法敏感性84.78%低于冷凝集试验97.83%，准确度88.00%，漏诊率15.22%高于冷凝集试验83.00%，2.17%，差异无统计学意义(P>0.05)。结果提示，两种方法均可检测小儿肺炎支原体感染，但临床均会出现误诊及漏诊情况。因此，临床检测可将两种方式联合进行检测，进而提高临床疾病检出率，降低疾病漏诊及误诊率，为临床治疗提供依据。
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综上所述，酶联免疫法与冷凝集试验均各有优势，冷凝集试验敏感性高，漏诊率低，酶联免疫法特异度高、误诊率较低，故临床可将二者联合检测，以提升小儿肺炎支原体感染阳性检出率，降低误诊及漏诊率，临床具有较高的应用价值。
参考文献：
[1]吕保芳.300例小儿肺炎支原体感染临床检验分析[J].检验医学与临床，2017，14(z1)：133-134.
[2]蔡军，罗显荣，贾钦尧，等.血清IgG联合IL-5、维生素D检测在肺炎支原体感染合并支气管哮喘患儿中的应用研究[J].临床肺科杂志，2017，22(09)：1617-1620.
[3]张磊，郭桂林，张如，等.实时定量PCR和ELISA检测支原体感染在儿童肺炎诊断中的应用[J].中国卫生检验杂志，2014，24(13)：1906-1908.
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[4] 王建红.肺炎支原体不同原理检测方法及其实用性探讨[J].临床肺科杂志，2014，19(06)：1139-1139.
[5]蔡翠云，黃新喜，吕葆真.肺炎支原体 ELISA 检测试剂盒的临床应用[J].微生物学免疫学进展，2014，42(04)：46-49.
[6]龚亚东，马庆庆，林牧.儿童肺炎支原体感染3种检测方法对比分析[J].现代医药卫生，2017，33(02)：251-253.
[7]吴建荣，骆益华，骆勇.2595例呼吸道感染儿童肺炎支原体抗体检测结果[J].浙江预防医学，2016，28(05)：518-519.
[8]周子博，谭峰，郑小平，等.被动凝集法和ELISA法检测成人肺炎支原体抗体的临床价值比较[J].中国病原生物学杂志，2014，9(07)：647-650.
[9]程春香.小儿肺炎支原体感染的临床检验分析[J].湖南中医药大学学报，2016，36(01)：78.
收稿日期：2017-12-18；修回日期：2017-12-21
编辑/雷华, 百拇医药(汤成玉)
支原体肺炎(mycoplasma pneumonia，MP)是引起哮喘、支气管炎及呼吸道感染等疾病常见的病原体，支原体介于病毒与细菌之间，主要生长于呼吸道上皮细胞中且可自主繁殖，可损伤细胞膜，对纤毛运动起到一定的抑制作用，最终引起感染[1]。近年来小儿支原体肺炎感染患病率呈逐年上升趋势发展，且多见于儿童，起病较缓慢，病程持续时间长短不一，临床症状表现为咳嗽、发烧等，由于与其他肺部感染症状较为相似，故容易出现漏诊或误诊。若患儿不及时治疗，可引起多器官功能障碍，严重时可致死[2]。因此，寻求一种高效的诊断方式来提高疾病检出率，对改善患儿生存质量，降低病死率均有重要意义[3]。既往临床通常采用以支原体培养为诊断“金标准”，但其操作方式较为复杂且检测所需时间较长，部分医院难以开展，因此寻求一种操作方便、高效的检测方式尤为重要[4]。本研究选取我院2015年3月～2017年3月收治的100例支气管肺炎患儿为研究对象，分别采用酶联免疫法及冷凝集试验检测血清肺炎支原体抗体IgM(MP-IgM)水平，进一步探究酶联免疫法与冷凝集试验在小儿支原体肺炎感染诊断中的应用价值，旨在为临床诊断疾病提供方法和经验，现报道如下。
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1 资料与方法
1.1 一般资料 选取我院2015年3月～2017年3月收治的支气管肺炎患儿100例，其中男性53例，女性47例；年龄2～13岁，平均年龄(6.12±2.15)岁；其中2～5岁48例，6～13岁52例。本研究经本院伦理委员会批准通过。纳入标准：①临床均有发热、食欲下降、呼吸困难、刺激性咳嗽等症状，肺部X线检查可见絮状阴影；②患儿家属对研究内容知情，并签署知情同意书。排除标准：①患儿合并先天性心、肾、肝等脏器器官疾病；②其他病因导致的肺炎感染。
1.2 方法 患儿均同时进行支原体分离培养：采取患儿痰液、鼻咽下拭子或支气管分泌物，将其放置培养基中，含有足量的新鲜酵母及血清浸出液，将其放置于37 ℃环境下培养5 d后，观察记录菌落。采取所有患儿清晨空腹静脉血3 ml，以3500 r/min离心15 min后取血清，将其放置在-20 ℃冰箱内冷藏备测，采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测血清支原体抗体(MP-IgM)水平，试剂盒由深圳安群生物技术有限公司提供，操作过程严格遵守试剂盒操作说明，当滴度>1：80则为阳性。此外，采用冷凝集试验血清MP-IgM水平，将致敏离子和未致敏粒子加入血清中，将其充分摇匀后，采用深圳安群生物技术有限公司提供的配套试剂盒检测MP-IgM水平，操作过程严格遵守试剂盒操作说明，当滴度≥1：64时，则为阳性。
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1.3观察指标 记录两种检测方法阳性、阴性检出率，以支原体培养为诊断“金标准”分析两种检测方式的特异性、灵敏性、准确率、阳性预测值进行评估。
1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件，计数资料以[n(%)]表示，组间比较采用？字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
酶联免疫法特异性90.75%较冷凝集试验高，误诊率为9.26%较冷凝集试验29.63%低，差异具有统计学意义(P<0.05)；酶联免疫法敏感性84.78%略低于冷凝集试验97.83%，准确度88.00%，漏诊率15.22%，略高于冷凝集试验准确度83.00%，漏诊率2.17%，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1、表2。
3讨论
肺炎支原体是诱发支原体肺炎感染的关键病毒，是一种独立存活在细胞外的最小微生物，临床发病机制尚未完全表达清楚[5]。小儿肺炎支原体感染具有较高的患病率，早期病情较为隐匿，且临床症状缺乏特异性，进而增加疾病误诊及漏诊率[6]。此外，还可导致临床抗生素的滥用、错用，加之病情反复发作，引发患儿免疫系统、中枢神经系统等并发症，严重危害患儿生长发育[7]。因此早期诊断疾病，并给予其相应的治疗对提高患儿生存质量具有重要意义[8]。
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目前临床诊断疾病的方法较多，包括酶联免疫法、冷凝集试验、支原体培养、免疫荧光法等，其中支原体培养被临床视为诊断小儿肺炎支原体感染“金标准”，临床虽具有较高的检出率，但其实验难度较大，操作过程繁杂且检测时间较长，不能快速的得出检测结果，且部分医院难以实行，故而临床推广难度较大[9]。因此采用高效、操作方便、快速准确的诊断方式对临床治疗尤为重要。近年来随着临床不断的研究，发现血清抗MP-IgM是患儿发病后机体内出现最早的特异性抗体，发病1周后出现，且在3～4周内可达到最高峰，由于早期病情较为隐匿，当患儿到院就诊时绝大多数患儿体内已出现血清抗MP-IgM，因此早期检测MP-IgM对疾病的检出率尤为重要。临床将冷凝集试验视为检测肺炎支原体感染一种传统辅助检测方式之一，具有较高的敏感性且漏诊率较低，但临床诊断过程中往往被误诊为其他病原体感染，因此单独采用冷凝集试验易增加疾病误诊率。酶联免疫法是临床辅助检查另一重要检测方式，不受患儿自身免疫应答影响，具有较高的特异性，且误诊率较低，被临床广泛应用。两种检测方式操作均较为简便，且检测结果较快，可为临床治疗争取更多时间。本研究结果显示，酶联免疫法特异性90.75%较冷凝集试验高，误诊率为9.26%较冷凝集试验29.63%低，差异具有统计学意义(P<0.05)；酶联免疫法敏感性84.78%低于冷凝集试验97.83%，准确度88.00%，漏诊率15.22%高于冷凝集试验83.00%，2.17%，差异无统计学意义(P>0.05)。结果提示，两种方法均可检测小儿肺炎支原体感染，但临床均会出现误诊及漏诊情况。因此，临床检测可将两种方式联合进行检测，进而提高临床疾病检出率，降低疾病漏诊及误诊率，为临床治疗提供依据。
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综上所述，酶联免疫法与冷凝集试验均各有优势，冷凝集试验敏感性高，漏诊率低，酶联免疫法特异度高、误诊率较低，故临床可将二者联合检测，以提升小儿肺炎支原体感染阳性检出率，降低误诊及漏诊率，临床具有较高的应用价值。
参考文献：
[1]吕保芳.300例小儿肺炎支原体感染临床检验分析[J].检验医学与临床，2017，14(z1)：133-134.
[2]蔡军，罗显荣，贾钦尧，等.血清IgG联合IL-5、维生素D检测在肺炎支原体感染合并支气管哮喘患儿中的应用研究[J].临床肺科杂志，2017，22(09)：1617-1620.
[3]张磊，郭桂林，张如，等.实时定量PCR和ELISA检测支原体感染在儿童肺炎诊断中的应用[J].中国卫生检验杂志，2014，24(13)：1906-1908.
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[4] 王建红.肺炎支原体不同原理检测方法及其实用性探讨[J].临床肺科杂志，2014，19(06)：1139-1139.
[5]蔡翠云，黃新喜，吕葆真.肺炎支原体 ELISA 检测试剂盒的临床应用[J].微生物学免疫学进展，2014，42(04)：46-49.
[6]龚亚东，马庆庆，林牧.儿童肺炎支原体感染3种检测方法对比分析[J].现代医药卫生，2017，33(02)：251-253.
[7]吴建荣，骆益华，骆勇.2595例呼吸道感染儿童肺炎支原体抗体检测结果[J].浙江预防医学，2016，28(05)：518-519.
[8]周子博，谭峰，郑小平，等.被动凝集法和ELISA法检测成人肺炎支原体抗体的临床价值比较[J].中国病原生物学杂志，2014，9(07)：647-650.
[9]程春香.小儿肺炎支原体感染的临床检验分析[J].湖南中医药大学学报，2016，36(01)：78.
收稿日期：2017-12-18；修回日期：2017-12-21
编辑/雷华, 百拇医药(汤成玉)