窦房结细胞形态学和组织学观察方法的现状(1)
摘 要：目的 窦房结是生物体心脏起搏点，因为窦房结的起搏，心脏才会收缩舒张，将血液泵至全身各器官组织。本文从取材方法、染色方法、观察技术、未来展望四个方面对窦房结细胞的形态学和组织学观察方法进展进行综述。
关键词：窦房结；组织学；形态学
中图分类号：R322.1 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.10.010
文章编号：1006-1959(2018)10-0030-04
Current Status of Morphological and Histological Observation of Sinoatrial Node Cells
ZHANG Lei1，CUI Ying-jian2，CHEN Hua1，ZHANG Fei1，ZHANG Yue1，ZHONG Qi1，LIU Shuang1，TAN Jian-ye1
, http://www.100md.com
Grade 2014，Clinical Medicine1，Department of Human Anatomy2，School of Medicine，Anhui University Of Science and Technology， Huainan 232001，Anhui，China)
Abstract：Objective Sinoatrial node is the pacemaker of biological heart， because the pacing of sinoatrial node will make the heart contract and relax，and pump blood into all organs and organs of the body.In this paper，the progress of morphological and histological observation of sinoatrial node cells was reviewed from four aspects：the method of taking material， the staining method，the observation technique and the future prospect.
, 百拇医药
Key words：Sinoatrial node；Histology；Morphology
隨着科技的发展，光镜-电镜的发明，人们对于心脏的形态学和组织学研究有了更进一步的研究。人们在面对以往束手无策的心脏传导系统疾病，有了人工瓣膜替换术和射频消融术，甚至可以用心脏移植来治疗疾病。而如今又有学者在动物体初步尝试自体窦房结细胞移植来治疗心脏部分心脏疾病，直到2013年张亚飞等[1]实验证明带蒂移植入自体心室的窦房结组织细胞可以和心肌细胞建立细胞连接，就此翻开了心脏窦房结研究的新篇章。由此可见，人们对心脏的认识不再仅仅局限于大体上，而是进一步发展到了显微、亚显微，甚至分子水平。本文就窦房结的形态学和组织学观察进展综述，以期有助于窦房结的形态学、组织学解剖和窦房结移植的发展。
1窦房结概述
窦房结(sinoatrialnode，SAN)是位于哺乳动物右心房上的一个特殊的小结节，由特殊的细胞构成。它可以自动地、有节律地产生电流，电流按传导组织的顺序传送到心脏的各个部位，从而引起心肌细胞的收缩和舒张，从而促使动脉血向远心端流动，同时促进静脉血回流。机体正常的心跳就是从这里发出的，这就是“心脏的正常起搏点”，窦房结就是心脏的主要起搏点[2，3]。窦房结细胞相当于一个“血泵”的发动机，启动整个心脏的跳动，使血液规律地在全身循环，供应全身各处的氧气和营养。
, http://www.100md.com
2取材方法的进展
动物体窦房结区定位、取材，是窦房结观察的关键步骤之一，因为取材、定位是否准确，将直接影响显微镜下窦房结细胞的观察。目前文献记载的窦房结组织取材定位大致有五类方法。
2.1根据窦房结的解剖位置来取材 即根据窦房结的解剖结构来定位取材。而动物与人的窦房结位置各有特点：人窦房结在上腔静脉和右心房交界处的界沟上1/3的心外膜深面。刘颖等[2]在人心窦房结组织获取中采用改良心脏传导系统解剖法。按照该位置，先从心脏静脉窦后方中线沿其长轴剪开，再从界沟左下方、与其平行相距1～1.5 cm处剪开直至越过右心耳嵴到其背后，用剪刀离断该组织与心房壁的连接处，即获得含有窦房结的组织块。王菲菲等[4]对心源性猝死患者窦房结细胞的特殊基因表达时，在人心脏窦房结位置获取窦房结组织。羊窦房结纵跨于上、下腔静脉口的全长之间，大多偏于界沟的腔静脉窦侧。张海东等[5]在介绍绵羊窦房结的取材时以该位置为指导获取窦房结组织。兔窦房结主要位于右房界沟的静脉窦侧，其长轴与界沟平行。祝瑜[6]等在兔窦房结的取材时按照该位置来取材，成功获得兔SAN。成年大鼠窦房结位于上(前)腔静脉与右心房交界区及交界区以上的上(前)腔静脉壁内，呈马蹄形。彭瑞云等[7]及刘燕青等[8，9]在成年大鼠窦房结的获取时，在该位置获得窦房结组织。方易冰等[10]在上腔静脉与右心房交界地明显搏动部位获取小鼠窦房结组织。狗窦房结位于界沟右侧，在腔耳角下方0.1～0.4 mm处向下延伸，赵欣等[11]在犬心脏腔耳角上方0.5 cm起点、界沟为中线，获取了窦房结组织。
2.2打结定位法和双酶解法 打结定位法是指在获取窦房结组织过程中，先找到上下腔静脉后，在两段用黑线打结标记，然后在两个线结间剪切以获取窦房结组织。高亚兵等[12]在做大鼠窦房结组织切片就是先打结定位，然后不断修剪，得到窦房结组织。双酶解法即是在打结定位法的基础上采用Ⅱ型胶原酶和弹性蛋白酶的无钙Tyrode液消化，以期在消化后，还能准确找到含有窦房结细胞的组织。殷春霞等[13]的豚鼠窦房结细胞分离中使用如上打结定位+双酶解法，成功提取窦房结细胞。田野等[14]在人胚胎窦房结细胞原代培养中，应用双酶解法，不同之处在于，先用较强的0.25%胰酶，再用0.1%的胶原酶作用。而在对照组中，先使用的是0.125%的胰酶。两者对照，结果发现前者取得较好结果，值得后来学者借鉴学习。, 百拇医药(张磊 崔英健 陈华)
关键词：窦房结；组织学；形态学
中图分类号：R322.1 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.10.010
文章编号：1006-1959(2018)10-0030-04
Current Status of Morphological and Histological Observation of Sinoatrial Node Cells
ZHANG Lei1，CUI Ying-jian2，CHEN Hua1，ZHANG Fei1，ZHANG Yue1，ZHONG Qi1，LIU Shuang1，TAN Jian-ye1
, http://www.100md.com
Grade 2014，Clinical Medicine1，Department of Human Anatomy2，School of Medicine，Anhui University Of Science and Technology， Huainan 232001，Anhui，China)
Abstract：Objective Sinoatrial node is the pacemaker of biological heart， because the pacing of sinoatrial node will make the heart contract and relax，and pump blood into all organs and organs of the body.In this paper，the progress of morphological and histological observation of sinoatrial node cells was reviewed from four aspects：the method of taking material， the staining method，the observation technique and the future prospect.
, 百拇医药
Key words：Sinoatrial node；Histology；Morphology
隨着科技的发展，光镜-电镜的发明，人们对于心脏的形态学和组织学研究有了更进一步的研究。人们在面对以往束手无策的心脏传导系统疾病，有了人工瓣膜替换术和射频消融术，甚至可以用心脏移植来治疗疾病。而如今又有学者在动物体初步尝试自体窦房结细胞移植来治疗心脏部分心脏疾病，直到2013年张亚飞等[1]实验证明带蒂移植入自体心室的窦房结组织细胞可以和心肌细胞建立细胞连接，就此翻开了心脏窦房结研究的新篇章。由此可见，人们对心脏的认识不再仅仅局限于大体上，而是进一步发展到了显微、亚显微，甚至分子水平。本文就窦房结的形态学和组织学观察进展综述，以期有助于窦房结的形态学、组织学解剖和窦房结移植的发展。
1窦房结概述
窦房结(sinoatrialnode，SAN)是位于哺乳动物右心房上的一个特殊的小结节，由特殊的细胞构成。它可以自动地、有节律地产生电流，电流按传导组织的顺序传送到心脏的各个部位，从而引起心肌细胞的收缩和舒张，从而促使动脉血向远心端流动，同时促进静脉血回流。机体正常的心跳就是从这里发出的，这就是“心脏的正常起搏点”，窦房结就是心脏的主要起搏点[2，3]。窦房结细胞相当于一个“血泵”的发动机，启动整个心脏的跳动，使血液规律地在全身循环，供应全身各处的氧气和营养。
, http://www.100md.com
2取材方法的进展
动物体窦房结区定位、取材，是窦房结观察的关键步骤之一，因为取材、定位是否准确，将直接影响显微镜下窦房结细胞的观察。目前文献记载的窦房结组织取材定位大致有五类方法。
2.1根据窦房结的解剖位置来取材 即根据窦房结的解剖结构来定位取材。而动物与人的窦房结位置各有特点：人窦房结在上腔静脉和右心房交界处的界沟上1/3的心外膜深面。刘颖等[2]在人心窦房结组织获取中采用改良心脏传导系统解剖法。按照该位置，先从心脏静脉窦后方中线沿其长轴剪开，再从界沟左下方、与其平行相距1～1.5 cm处剪开直至越过右心耳嵴到其背后，用剪刀离断该组织与心房壁的连接处，即获得含有窦房结的组织块。王菲菲等[4]对心源性猝死患者窦房结细胞的特殊基因表达时，在人心脏窦房结位置获取窦房结组织。羊窦房结纵跨于上、下腔静脉口的全长之间，大多偏于界沟的腔静脉窦侧。张海东等[5]在介绍绵羊窦房结的取材时以该位置为指导获取窦房结组织。兔窦房结主要位于右房界沟的静脉窦侧，其长轴与界沟平行。祝瑜[6]等在兔窦房结的取材时按照该位置来取材，成功获得兔SAN。成年大鼠窦房结位于上(前)腔静脉与右心房交界区及交界区以上的上(前)腔静脉壁内，呈马蹄形。彭瑞云等[7]及刘燕青等[8，9]在成年大鼠窦房结的获取时，在该位置获得窦房结组织。方易冰等[10]在上腔静脉与右心房交界地明显搏动部位获取小鼠窦房结组织。狗窦房结位于界沟右侧，在腔耳角下方0.1～0.4 mm处向下延伸，赵欣等[11]在犬心脏腔耳角上方0.5 cm起点、界沟为中线，获取了窦房结组织。
2.2打结定位法和双酶解法 打结定位法是指在获取窦房结组织过程中，先找到上下腔静脉后，在两段用黑线打结标记，然后在两个线结间剪切以获取窦房结组织。高亚兵等[12]在做大鼠窦房结组织切片就是先打结定位，然后不断修剪，得到窦房结组织。双酶解法即是在打结定位法的基础上采用Ⅱ型胶原酶和弹性蛋白酶的无钙Tyrode液消化，以期在消化后，还能准确找到含有窦房结细胞的组织。殷春霞等[13]的豚鼠窦房结细胞分离中使用如上打结定位+双酶解法，成功提取窦房结细胞。田野等[14]在人胚胎窦房结细胞原代培养中，应用双酶解法，不同之处在于，先用较强的0.25%胰酶，再用0.1%的胶原酶作用。而在对照组中，先使用的是0.125%的胰酶。两者对照，结果发现前者取得较好结果，值得后来学者借鉴学习。, 百拇医药(张磊 崔英健 陈华)