1材料与方法

    1.1材料与试剂 肺腺癌细胞A549，泰安市中心医院；小牛血清；RPMI1640粉剂；胰蛋白酶；索拉非尼；P-VEGFR-2多克隆抗体(兔抗人)；P-VEGFR-3多克隆抗体(兔抗人)；碱性磷酸酶标记的二抗(抗兔)。

    1.2主要设备 倒置显微镜 IX70，Olympus；细胞培养箱(311型)；电子天平；超净工作台 SW-CJ-1F；60 mm培养皿；低温超速离心机；立时压力蒸汽灭菌器；紫外分光光度计；垂直平板；电泳槽、转移电泳槽、稳压稳流电泳仪、半干电转移仪；GDS 8000型凝胶成像分析系统；气浴恒温振荡器；DDY-2C型电泳仪；电热恒温水温箱；加样枪(1000 μl、100 μl和0.5～10 μl)Eppendorf，德国；烘干箱。

    1.3细胞培养 将取出的冻存管直接投入37 ℃温水中，并轻轻摇动令其尽量融化。从37 ℃水浴中取出冻存管，用酒精消毒后开启，用吸管吸出细胞悬液，注入离心管并滴加10倍以上体积的培养液，混合后低速离心800 rpm ......