瘢痕组织中胶原蛋白提取及纯化研究(2)
速下离心10 min,收集上清液,沉淀加4倍体积的胃蛋白酶消化液重复酶解1次,离心,取上清液,再搅拌5 min,离心得到上清液为液态粗制胶原。在粗制胶原中加入氯化钠使其浓度为1 mol/L,4 ℃盐析过夜,离心后弃去上清液,沉淀物中加入0.5 M乙酸,即为精制胶原,将精制液态胶原放入圆盘器皿中,表面加入固体氯化钠(比例0.1 g/ml),器皿液态胶原中水分析出,底层沉淀物为形成胶原膜,胶原膜干燥后即瘢痕胶原蛋白膜。2结果
采用上述酶消化法及酸溶解法,我们共提取瘢痕胶原20批液态精制胶原,将所得精制胶原标本做氨基酸含量分析及紫外分光吸收检验,结果如下。
2.1氨基酸含量分析结果 甘氨酸占氨基酸总量的30%以上,符合来源瘢痕皮肤组织胶原蛋白的标准,见表1。
2.2紫外分光吸收检验结果 标本中的胶原蛋白在230 nm波长下有强烈的光吸收.符合来源皮肤胶原蛋白的特性 ......
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