1材料和方法

    1.1主要试剂 血管内皮生长因子(VEGF蛋白，50 μg)购自 PeproTech 公司；Ⅰ型胶原酶(60 U)购自Sigma公司；VEGF- ELISA试剂盒(96 t)购自北京健平九星生物医药科技有限公司；水溶性四唑盐 WST-1试剂(100 mg)购自东仁化学科技有限公司。

    1.2实验动物及分组 选择 4～6 周龄雌性裸小鼠10只(空军军医大学动物实验中心提供)，所有实验动物均在该中心SPF级动物房中分笼饲养，饮水、饲料等物品均灭菌处理后使用，实验操作按无菌原则进行。

    1.3实验方法

    1.3.1脂肪干细胞提取和培养 脂肪组织来源于我院肿瘤外科行副乳切除的脂肪组织，总量约10 ml，剪成约为1 mm3 的小块，PBS反复冲洗。加入0.1% Ⅰ型胶原酶进行原代细胞分离和接种培养。24 h后换液1次，以后每2～3 d换液，待细胞密度达80%～90%时，用0.25%胰蛋白酶消化后传代培养。选取生长良好的第3代细胞做多向分化及体内实验，观察原代及传代脂肪干细胞ADSCs形态及生长状况。

    1.3.2血管内皮生长因子-聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球制备 VEGF蛋白溶解得到内水相(W2) ......