糖尿病胰岛病变及胰岛β细胞胰岛素分泌损伤检测的整合实验相关经验探讨(1)
摘要：胰岛素的生理作用及分泌调节是《内分泌系统》的重点内容，学生通过实验课的实践操作有助于加深对理论知识的了解。本文介绍了我院传统《内分泌系统》胰岛相关实验课程设置的缺点，及针对此进行的整合实验改革的内容及成果，并就存在的难点问题做了分析与探讨。
关键词：内分泌系统;糖尿病;胰腺;β细胞;胰岛素
中图分类号：G640;R587.1 文獻标识码：B DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.01.006
文章编号：1006-1959(2019)01-0018-03
Experience in the Integration Experiment of Diabetic Islet Lesions and Islet β-cell Insulin Secretion Damage Detection
, 百拇医药
ZHANG Yi-lin，HUANG Xiao-yan，ZHAO Ying-ying，SHU Xing-sheng，WANG Zi-mei，YING Ying
(Health Science Center School of Basic Medical Sciences，Shenzhen University，Shenzhen 518060， Guangdong，China)
Abstract：The physiological function and secretion regulation of insulin are the key contents of endocrine system. The practical operation through experimental courses will be benefit to deepen the understanding of theoretical knowledge. This article introduces the shortcomings of the traditional islet related experiments of endocrine system in our school， as well as the contents and achievements of the integrated experimental reform carried out in this regard. We also discuss and analyze the difficult problems of existence.
, http://www.100md.com
Key words：endocrine system， diabetes， pancreas， β cells， insulin
《内分泌系统》是一门与临床医学息息相关的重要基础课程。而胰腺相关疾病里，糖尿病是一种由诸如环境因素、遗传因素、应激因素等多重因素引起的慢性非传染的代谢性疾病[1]。其发病机制是由于胰岛β细胞受损而引起胰岛素分泌减少、胰岛素受体减少或敏感性降低的一类自身免疫性疾病，是全人类慢性病中的一个重大难题[2]。有研究表明，糖尿病与阿尔茨海默症也具有一定的关联性[3]。之前的实验课程设置中，在内分泌系统胰岛相关的实验教学方面，基于8学时的课程要求，学生只进行了正常小鼠胰岛分离与胰岛素分泌刺激两部分实验，实验设置方面未涉及糖尿病胰岛病变和胰岛β细胞胰岛素分泌受损的检测，在胰岛相关教学上显得较为苍白，极大地限制了学生对于内分泌系统中胰腺常见疾病——糖尿病的全面了解。针对存在的问题，我们进行了整合实验改革，在同样有限的学时内，加入糖尿病模型鼠的实验组，并采用实验动手教学与多媒体教学相结合，深化学生对胰岛素正常生理作用及分泌异常导致糖尿病发生发展的发病机制的全面了解。在教学实践过程中，让学生通过：①了解糖尿病小鼠造模;②小鼠葡萄糖耐量实验与小鼠胰岛素耐量实验验证造模并分析;③分离小鼠胰岛观察葡萄糖糖刺激胰岛素分泌情况;④胰腺组织切片染色观察胰岛形态结构或胰岛素含量变化等一系列试验来强化学生对糖尿病发生发展的认知，加强了理论与实践的结合能力，促进了教学与科研的结合，也大大提升了教学效率，对学生日后的学习理解起到良好的促进，有利于今后的综合发展。
, http://www.100md.com
1整合实验改革内容
1.1课前准备 此项要求教师及实验技术助理有较好的专业技能和长时间的准备。
1.1.1糖尿病造模 糖尿病鼠造模常规为链脲佐菌素STZ造模和高脂饲养造模。因STZ鼠造模会损伤胰岛β细胞[4]，大量降低后面胰岛分离所得数量，我们采取高脂造模，采用4周龄的小鼠于清洁动物房高脂饲养12周。此部分由教师及实验员实验前期提前准备。
1.1.2饥饿处理与试剂准备 在做胰岛素耐量实验IPITT和口服葡萄糖耐量实验OGTT之前饥饿小鼠8 h，准备好注射要用的胰岛素溶液与葡萄糖溶液。
1.1.3制作胰腺石蜡切片及免疫荧光染色，图片储存用于多媒体教学展示 造模成功以后，杀鼠取胰腺在多聚甲醛中固定72 h，做脱水包埋。切5 μm薄片做免疫荧光染色。免疫荧光染色法标记insulin和DAPI，以检测胰岛素的分泌情况。将拍好的图片制成PPT用于课堂多媒体教学的展示，使学生掌握正常及糖尿病小鼠胰岛的镜下结构，胰岛素含量及分泌的差异，观察对理论知识的掌握。, 百拇医药(张熠霖 皇晓燕 赵滢滢 舒兴盛 王子梅 应颖)
关键词：内分泌系统;糖尿病;胰腺;β细胞;胰岛素
中图分类号：G640;R587.1 文獻标识码：B DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.01.006
文章编号：1006-1959(2019)01-0018-03
Experience in the Integration Experiment of Diabetic Islet Lesions and Islet β-cell Insulin Secretion Damage Detection
, 百拇医药
ZHANG Yi-lin，HUANG Xiao-yan，ZHAO Ying-ying，SHU Xing-sheng，WANG Zi-mei，YING Ying
(Health Science Center School of Basic Medical Sciences，Shenzhen University，Shenzhen 518060， Guangdong，China)
Abstract：The physiological function and secretion regulation of insulin are the key contents of endocrine system. The practical operation through experimental courses will be benefit to deepen the understanding of theoretical knowledge. This article introduces the shortcomings of the traditional islet related experiments of endocrine system in our school， as well as the contents and achievements of the integrated experimental reform carried out in this regard. We also discuss and analyze the difficult problems of existence.
, http://www.100md.com
Key words：endocrine system， diabetes， pancreas， β cells， insulin
《内分泌系统》是一门与临床医学息息相关的重要基础课程。而胰腺相关疾病里，糖尿病是一种由诸如环境因素、遗传因素、应激因素等多重因素引起的慢性非传染的代谢性疾病[1]。其发病机制是由于胰岛β细胞受损而引起胰岛素分泌减少、胰岛素受体减少或敏感性降低的一类自身免疫性疾病，是全人类慢性病中的一个重大难题[2]。有研究表明，糖尿病与阿尔茨海默症也具有一定的关联性[3]。之前的实验课程设置中，在内分泌系统胰岛相关的实验教学方面，基于8学时的课程要求，学生只进行了正常小鼠胰岛分离与胰岛素分泌刺激两部分实验，实验设置方面未涉及糖尿病胰岛病变和胰岛β细胞胰岛素分泌受损的检测，在胰岛相关教学上显得较为苍白，极大地限制了学生对于内分泌系统中胰腺常见疾病——糖尿病的全面了解。针对存在的问题，我们进行了整合实验改革，在同样有限的学时内，加入糖尿病模型鼠的实验组，并采用实验动手教学与多媒体教学相结合，深化学生对胰岛素正常生理作用及分泌异常导致糖尿病发生发展的发病机制的全面了解。在教学实践过程中，让学生通过：①了解糖尿病小鼠造模;②小鼠葡萄糖耐量实验与小鼠胰岛素耐量实验验证造模并分析;③分离小鼠胰岛观察葡萄糖糖刺激胰岛素分泌情况;④胰腺组织切片染色观察胰岛形态结构或胰岛素含量变化等一系列试验来强化学生对糖尿病发生发展的认知，加强了理论与实践的结合能力，促进了教学与科研的结合，也大大提升了教学效率，对学生日后的学习理解起到良好的促进，有利于今后的综合发展。
, http://www.100md.com
1整合实验改革内容
1.1课前准备 此项要求教师及实验技术助理有较好的专业技能和长时间的准备。
1.1.1糖尿病造模 糖尿病鼠造模常规为链脲佐菌素STZ造模和高脂饲养造模。因STZ鼠造模会损伤胰岛β细胞[4]，大量降低后面胰岛分离所得数量，我们采取高脂造模，采用4周龄的小鼠于清洁动物房高脂饲养12周。此部分由教师及实验员实验前期提前准备。
1.1.2饥饿处理与试剂准备 在做胰岛素耐量实验IPITT和口服葡萄糖耐量实验OGTT之前饥饿小鼠8 h，准备好注射要用的胰岛素溶液与葡萄糖溶液。
1.1.3制作胰腺石蜡切片及免疫荧光染色，图片储存用于多媒体教学展示 造模成功以后，杀鼠取胰腺在多聚甲醛中固定72 h，做脱水包埋。切5 μm薄片做免疫荧光染色。免疫荧光染色法标记insulin和DAPI，以检测胰岛素的分泌情况。将拍好的图片制成PPT用于课堂多媒体教学的展示，使学生掌握正常及糖尿病小鼠胰岛的镜下结构，胰岛素含量及分泌的差异，观察对理论知识的掌握。, 百拇医药(张熠霖 皇晓燕 赵滢滢 舒兴盛 王子梅 应颖)