雷公藤多苷促进斑马鱼肝脏损伤和氧化应激的实验研究(3)
2.2雷公藤多苷破坏斑马鱼肝脏结构的实验结果 HE染色结果提示：对乙酰氨基酚对斑马鱼有明显肝毒性，主要表现为细胞肿大，细胞核模糊且细胞间质变大;雷公藤多苷片浓度为42.5 μg/ml时，斑马鱼肝脏组织结构略有改变，组织间隙增大，对肝脏细胞影响不大;雷公藤多苷片浓度为128 μg/ml时，明显破坏了斑马鱼肝脏组织结构，表现为组织结构紊乱，细胞质变大;雷公藤多苷片浓度为383 μg/ml时，明显破坏了斑马鱼肝脏组织结构，表现为组织结构紊乱，细胞质变大，此外细胞核大小不一，见图2。
2.3雷公藤多苷诱导斑马鱼肝细胞凋亡的结果
2.3.1对CAT的影响 对乙酰氨基酚组斑马鱼体内CAT活力为0.159 units，与正常对照组(0.187 units)比较降低了15.00%，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示对乙酰氨基酚对斑马鱼体内CAT活力影响不显著。雷公藤多苷片42.5、128和383 μg/ml浓度组斑马鱼体内CAT活力分别为0.156、0.146和0.152 units，与正常对照组比较分别降低了16.60%、21.90%和18.70%，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示雷公藤多苷片在本实验浓度条件下对斑马鱼体内CAT活力影响不明显，见图3。
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2.3.2对SOD的影响 对乙酰氨基酚组斑马鱼体内SOD活力为0.082 U/mg蛋白，与正常对照组(0.083 U/mg蛋白)比较降低了1.20%，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示对乙酰氨基酚对斑马鱼体内SOD活力无影响。雷公藤多苷片42.5、128和383 μg/ml浓度组斑马鱼体内SOD活力分别为0.0104、0.063和0.083 U/mg蛋白，与正常对照组比较分别降低了25.30%、24.10%和0，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示雷公藤多苷片在本实验浓度条件下对斑马鱼体内SOD活力影响不明显，见图4。
2.3.3对MDA的影响 对乙酰氨基酚组斑马鱼体内MDA含量为0.0011 μmol/mg蛋白，与正常对照组(0.0014 μmol/mg蛋白)比较升高了27.30%，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示对乙酰氨基酚能增加斑马鱼体内MDA含量，但无明显差异。雷公藤多苷片42.5、128和383 μg/ml浓度组斑马鱼体内MDA含量分别为0.0020、0.0018和0.0015 μmol/mg蛋白，与正常对照组比较分别升高了81.80%、63.60%和36.40%，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示雷公藤多苷片在本实验浓度条件下能促进斑马鱼体内MDA含量，但无明显差异，见图5。
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3讨论
肝脏是人体非常重要的器官，也是体内最大的解毒器官，肩负着消化、代谢、解毒、凝血、免疫调节等重要的功能。作为体内最大的解毒器官，肝脏与药物的代謝密切相关，当肝脏受到伤害时，肝脏相应的功能将受到影响。目前，关于雷公藤及其制剂导致肝脏损伤的作用机制主要有4种，分别为组织氧化应激损伤[26，27]、肝脏代谢紊乱[28]、诱导性肝细胞凋亡损伤[29，30]、肝药酶抑制导致药物蓄积损伤[31，32]。
氧化应激(oxidative stress，OS)是指体内氧化作用与抗氧化作用失去平衡，从而导致蛋白酶分泌增加、中性粒细胞发生炎性浸润，产生大量氧化中间产物[33，34]。氧化应激被认为是导致机体衰老和疾病的一个非常重要的因素。氧化应激对机体是一种损伤性反应，出于自我保护，机体内存在抗氧化应激系统，它主要有两部分组成：一类是酶抗氧化系统，主要包括超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)等;另一类是非酶抗氧化系统，包括维生素E、维生素C、谷胱甘肽、褪黑素、类胡萝卜素、微量元素等。
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为考察雷公藤多苷对斑马鱼肝脏是否具有损伤作用，本研究从以下三个方面进行了研究：①确定雷公藤多苷对斑马鱼的最大非致死浓度(MNLC)和LC10：根据不同给药剂量、不同给药时间斑马鱼的死亡情况，计算MNLC和LC10，再根据这两个浓度去设置后续实验用药浓度。②组织学观察：通过检测不同剂量组斑马鱼的肝脏组织病理学，观察细胞结构水平下肝脏的损伤情况。③肝脏氧化应激损伤检查：当给药后肝脏发生氧化应激时，体内自由基大量增加，此时体内的抗氧化系统会开始工作，超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶、丙二醛(MDA)即为体内的抗氧化系统的重要成员，通过测定其含量可间接的反应机体氧化应激情况。结果提示：雷公藤多苷片浓度为42.5、128 、383 μg/ml时可明显破坏斑马鱼肝脏组织结构。
综上所述，雷公藤多苷可通过诱导氧化应激促进斑马鱼的肝损伤。
参考文献：
[1]刘升.雷公藤多苷治疗慢性特发性荨麻疹效果分析[J].中国卫生标准管理，2018，9(18)：104-105.
, 百拇医药
[2]陈菁，王彤.雷公藤多苷片用于慢性肾炎治疗的效果评价[J].中国处方药，2018，16(9)：77-78.
[3]张红，薛中柱.雷公藤多苷联合甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎短期疗效研究[J].吉林中医药，2018，38(6)：660-663.
[4]王萍.雷公藤多苷联合激素治疗中度活动型系统性红斑狼疮的临床效果分析[J].中国实用医药，2018，13(13)：99-100.
[5]杨冬梅，刘俊.雷公藤多苷临床应用及不良反应的研究进展[J].中国医院药学杂志，2018，38(20)：1-6.
[6]印成霞.55例雷公藤多甙片/雷公藤多苷片致不良反应文献分析[J].中国药物警戒，2013，10(8)：478-482.
[7]赵叶.182例雷公藤多苷片不良反应分析及预防措施[J].山东中医杂志，2012，31(8)：572-574., http://www.100md.com(付晓春 沈小莉 李红群 朱家乐 蒋平)
2.3雷公藤多苷诱导斑马鱼肝细胞凋亡的结果
2.3.1对CAT的影响 对乙酰氨基酚组斑马鱼体内CAT活力为0.159 units，与正常对照组(0.187 units)比较降低了15.00%，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示对乙酰氨基酚对斑马鱼体内CAT活力影响不显著。雷公藤多苷片42.5、128和383 μg/ml浓度组斑马鱼体内CAT活力分别为0.156、0.146和0.152 units，与正常对照组比较分别降低了16.60%、21.90%和18.70%，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示雷公藤多苷片在本实验浓度条件下对斑马鱼体内CAT活力影响不明显，见图3。
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2.3.2对SOD的影响 对乙酰氨基酚组斑马鱼体内SOD活力为0.082 U/mg蛋白，与正常对照组(0.083 U/mg蛋白)比较降低了1.20%，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示对乙酰氨基酚对斑马鱼体内SOD活力无影响。雷公藤多苷片42.5、128和383 μg/ml浓度组斑马鱼体内SOD活力分别为0.0104、0.063和0.083 U/mg蛋白，与正常对照组比较分别降低了25.30%、24.10%和0，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示雷公藤多苷片在本实验浓度条件下对斑马鱼体内SOD活力影响不明显，见图4。
2.3.3对MDA的影响 对乙酰氨基酚组斑马鱼体内MDA含量为0.0011 μmol/mg蛋白，与正常对照组(0.0014 μmol/mg蛋白)比较升高了27.30%，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示对乙酰氨基酚能增加斑马鱼体内MDA含量，但无明显差异。雷公藤多苷片42.5、128和383 μg/ml浓度组斑马鱼体内MDA含量分别为0.0020、0.0018和0.0015 μmol/mg蛋白，与正常对照组比较分别升高了81.80%、63.60%和36.40%，但差异无统计学意义(P>0.05)，提示雷公藤多苷片在本实验浓度条件下能促进斑马鱼体内MDA含量，但无明显差异，见图5。
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3讨论
肝脏是人体非常重要的器官，也是体内最大的解毒器官，肩负着消化、代谢、解毒、凝血、免疫调节等重要的功能。作为体内最大的解毒器官，肝脏与药物的代謝密切相关，当肝脏受到伤害时，肝脏相应的功能将受到影响。目前，关于雷公藤及其制剂导致肝脏损伤的作用机制主要有4种，分别为组织氧化应激损伤[26，27]、肝脏代谢紊乱[28]、诱导性肝细胞凋亡损伤[29，30]、肝药酶抑制导致药物蓄积损伤[31，32]。
氧化应激(oxidative stress，OS)是指体内氧化作用与抗氧化作用失去平衡，从而导致蛋白酶分泌增加、中性粒细胞发生炎性浸润，产生大量氧化中间产物[33，34]。氧化应激被认为是导致机体衰老和疾病的一个非常重要的因素。氧化应激对机体是一种损伤性反应，出于自我保护，机体内存在抗氧化应激系统，它主要有两部分组成：一类是酶抗氧化系统，主要包括超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)等;另一类是非酶抗氧化系统，包括维生素E、维生素C、谷胱甘肽、褪黑素、类胡萝卜素、微量元素等。
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为考察雷公藤多苷对斑马鱼肝脏是否具有损伤作用，本研究从以下三个方面进行了研究：①确定雷公藤多苷对斑马鱼的最大非致死浓度(MNLC)和LC10：根据不同给药剂量、不同给药时间斑马鱼的死亡情况，计算MNLC和LC10，再根据这两个浓度去设置后续实验用药浓度。②组织学观察：通过检测不同剂量组斑马鱼的肝脏组织病理学，观察细胞结构水平下肝脏的损伤情况。③肝脏氧化应激损伤检查：当给药后肝脏发生氧化应激时，体内自由基大量增加，此时体内的抗氧化系统会开始工作，超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶、丙二醛(MDA)即为体内的抗氧化系统的重要成员，通过测定其含量可间接的反应机体氧化应激情况。结果提示：雷公藤多苷片浓度为42.5、128 、383 μg/ml时可明显破坏斑马鱼肝脏组织结构。
综上所述，雷公藤多苷可通过诱导氧化应激促进斑马鱼的肝损伤。
参考文献：
[1]刘升.雷公藤多苷治疗慢性特发性荨麻疹效果分析[J].中国卫生标准管理，2018，9(18)：104-105.
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[2]陈菁，王彤.雷公藤多苷片用于慢性肾炎治疗的效果评价[J].中国处方药，2018，16(9)：77-78.
[3]张红，薛中柱.雷公藤多苷联合甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎短期疗效研究[J].吉林中医药，2018，38(6)：660-663.
[4]王萍.雷公藤多苷联合激素治疗中度活动型系统性红斑狼疮的临床效果分析[J].中国实用医药，2018，13(13)：99-100.
[5]杨冬梅，刘俊.雷公藤多苷临床应用及不良反应的研究进展[J].中国医院药学杂志，2018，38(20)：1-6.
[6]印成霞.55例雷公藤多甙片/雷公藤多苷片致不良反应文献分析[J].中国药物警戒，2013，10(8)：478-482.
[7]赵叶.182例雷公藤多苷片不良反应分析及预防措施[J].山东中医杂志，2012，31(8)：572-574., http://www.100md.com(付晓春 沈小莉 李红群 朱家乐 蒋平)