KIF14在前列腺癌细胞中的表达及作用(2)
1材料与方法1.1细胞培养和转染 PCa细胞系22Rv1购自ATCC。将细胞维持在含有10%胎牛血清(FBS),1%青-链霉素和2.5 mM谷氨酰胺的RPMI 1640培养基(Invitrogen)中,在37℃ 5%CO2条件下培养。KIF14-siRNA(siKIF14,Santa Cruz,sc-60882)和对照siRNA(siControl,Santa Cruz,sc-37007)购自美国Santa Cruz 生物技术公司。使用RNAiMAX转染试剂(Invitrogen,13778)根据制造商的说明进行转染。
1.2试验方法
1.2.1 RNA提取、逆转录和定量实时PCR 用Trizol试剂提取RNA。正常前列腺RNA购自美国Clontech公司。随机六聚体和SuperScript-Ⅲ(Invitrogen)进行逆转录。使用实时PCR Master Mix(SYBR Green)通过Applied Biosystems 7300实时系统进行实时定量PCR ......
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