肠通对小鼠便秘的有效性研究(2)
Key words：Constipation;Intestinal pass;Dumilk;Ink;Laxative
老年性便秘是一种起病诱因极其复杂的疾病，涉及面广，表现为一系列生理、心理和精神状态的改变，发生率随年龄增长而增加至15%～30%，各种原因导致的肠传导功能失常或肠内津液不足都可引发便秘，而长期住院患者发病率高达80%以上，易引发脑血管破裂、心梗等并发症，危及生命[1-4]。因此，防治老年性便秘具有十分重要的意义。药食同源食品在国际上的重视程度越来越高[5]，肠通则是依据中医“药食同源”特性，結合现代肠道微生态研究进展，根据老年性便秘特点研制的食品。为了检测肠通的有效性与安全性，本研发团队开展了肠通对小鼠便秘的有效性研究，现报告如下。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1实验对象 昆明小鼠(Kunming mice，KM小鼠)，18～22 g，雌雄各半，共120只，由西南医大学实验动物中心提供SCXK(川)2013-17，通过了西南医科大学动物实验伦理审查，遵照动物福利进行实验，饲养温度20～25℃，湿度40%～70%。实验中动物均单笼饲养，正常饮水进食。
, 百拇医药
1.1.2实验药物 炭粉液[6](首粒黑便指示剂)：加水400 ml将阿拉伯树胶(迈瑞尔9000-01-5)100 g配成0.25%透明溶液，将活性炭粉(嵩山滤材活性炭厂)50 g加至上述溶液中煮沸3次，冷却后加水至500 ml，于4℃冰箱保存，用前摇匀，并加入等量蒸馏水，制得炭粉液待用(0.01 ml/g)。复方地芬诺酯(康普药业，1109027)混悬液：2片复方地芬诺酯片(2.5 mg/片)研磨成粉，加入2.5 ml水均匀混合。肠通(岷宏)：用0.9%NS以正常成人0.0025 mg/d为标准配置成不同浓度悬液。0.9%NS(四药)。杜密克(荷兰Abbott Biologicals， B.VH20120387)。
1.2方法
1.2.1造模及分组 ①造模：复方地芬诺酯法：小鼠100只禁食16 h后按10 mg/kg一次灌胃。用该模型模拟临床非特异性便秘[7]，即造模后小鼠排便减少或难排便，与临床症状及诊断基本相同。以小鼠出现竖毛、少动、蜷曲、蹲伏、不进食，大便干硬，排便次数减少，粪便颗粒明显变细、变小为成功标志。NS灌胃法：小鼠20只用0.9%NS灌胃(用于空白组的造模)。造模30 min后进行分组。②分组(20只/组)：○a肠通组：高(10 mg/只)、中(5 mg/只)、低(2.5 mg/只)剂量组，相当于人体剂量的5、10、20倍，用肠通与墨汁等体积混合物进行灌胃，0.1 ml/只。○b阳性对照组：杜密克与墨汁等体积混合灌胃，67 mg/只，0.1 ml/只。○c模型组：墨汁灌胃，0.1 ml/只。④空白组：墨汁灌胃，0.1 ml/只。
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1.2.2小肠推进实验 灌胃25 min后每组立即脱颈处死小鼠10只，计算墨汁推进率[8]：剪取上自幽门、下至回盲肠部的肠管为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”[7];取小肠标本做病理学检查。墨汁推进率(%)=墨汁推进长度(cm)/小肠总长度(cm)×100%。
1.3观察指标 观察各组的墨汁推进率、首粒排黑便时间、6 h内排黑便粒数、含水量[含水量=(湿重-干重)/湿重×100%]、有无死亡以及病理学。于小鼠幽门下15 cm空肠处剪取2 mm×3 mm肠壁，用4℃ 0.9% NS清洗后置于冷多聚甲醛-戊二醛固定液。
1.4数据处理 采用SPSS 11.0统计软件处理数据，计量资料以(x±s)表示，采用t检验。符合方差分析的数据采用单因素方差分析，非正态的数据采用Kruskal-Wallis H多组秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
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2.1肠通对便秘小鼠墨汁推进率的影响 ①小肠总长度：各组小鼠小肠总长度比较，差异无统计学意义(P>0.05)。②墨汁推进长度：空白组墨汁推进长度均大于其余各组，差异具有统计学意义(P<0.05);空白组墨汁推进长度大于肠通高剂量组，差异有统计学意义(t=5.81，P=0.00);肠通高、中、低剂量组墨汁推进长度均大于模型组，差异具有统计学意义(t=6.75，8.90，9.08;P<0.05)。③墨汁推进率：空白组墨汁推进率均大于其余各组，差异具有统计学意义(P<0.05);肠通高中低剂量组墨汁推进率有所上升，与阳性对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05);肠通高、中、低剂量组墨汁推进率均大于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。
2.2小鼠排便实验结果 ①首粒排便时间：与空白组比较，肠通高、中、低剂量组，阳性对照组，模型组的首粒排便时间均延长，差异具有统计学意义(t=7.22，7.13，6.66，7.36，9.29;P=0.00)。②6 h排便粒数：模型组6 h排便粒数少于其余各组，差异有统计学意义(P<0.05)。③排便含水量：与模型组比较，肠通高、中、低剂量组，阳性对照组的排便含水量均升高，差异具有统计学意义(t=4.40，5.27，6.19，9.84;P=0.00)，见表2。
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2.3小鼠死亡情况 各组小鼠均无死亡。
2.4组织病理学检查 各组小肠绒毛排列整齐，结构完整，见图1。
3讨论
便秘以排便困难为主要病症，可引发痔疮、肛裂等并发症，且易诱发老年人心脑血管等慢性疾病的发生发展[9，10]。随着生活水平的改善，便秘在老年人中发病率逐渐增高，其在中医学被称为“大便难”“不更衣”“脾约”“阳结”“阴结”等，病因有饮食不节、年老体弱、情绪失调、气机郁滞等，与胃、肠、肝、肾、脾、肺功能失调相关，而老年性便秘从病因、发病机制及临床症状上讲，属现代医学中的功能性便秘[11]。西医多采用服用西沙必利片、乳果糖口服液、导泻剂等，虽有一定治疗效果，但会引起一定毒副反应，如恶心、呕吐、腹泻、水电解质紊乱等[12，13]。中医多采用中药内服、针灸推拿、敷脐疗法等[14，15]，治疗方法多样，疗效确切，安全无毒副作用，中医药治疗老年性便秘的优势明显，经济适用，标本兼顾，越来越受到重视[16]。, http://www.100md.com(付满玲 庞艳 杨树娟 胡方园 杨升 周玉霞 胡月 刘珉甬)
老年性便秘是一种起病诱因极其复杂的疾病，涉及面广，表现为一系列生理、心理和精神状态的改变，发生率随年龄增长而增加至15%～30%，各种原因导致的肠传导功能失常或肠内津液不足都可引发便秘，而长期住院患者发病率高达80%以上，易引发脑血管破裂、心梗等并发症，危及生命[1-4]。因此，防治老年性便秘具有十分重要的意义。药食同源食品在国际上的重视程度越来越高[5]，肠通则是依据中医“药食同源”特性，結合现代肠道微生态研究进展，根据老年性便秘特点研制的食品。为了检测肠通的有效性与安全性，本研发团队开展了肠通对小鼠便秘的有效性研究，现报告如下。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1实验对象 昆明小鼠(Kunming mice，KM小鼠)，18～22 g，雌雄各半，共120只，由西南医大学实验动物中心提供SCXK(川)2013-17，通过了西南医科大学动物实验伦理审查，遵照动物福利进行实验，饲养温度20～25℃，湿度40%～70%。实验中动物均单笼饲养，正常饮水进食。
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1.1.2实验药物 炭粉液[6](首粒黑便指示剂)：加水400 ml将阿拉伯树胶(迈瑞尔9000-01-5)100 g配成0.25%透明溶液，将活性炭粉(嵩山滤材活性炭厂)50 g加至上述溶液中煮沸3次，冷却后加水至500 ml，于4℃冰箱保存，用前摇匀，并加入等量蒸馏水，制得炭粉液待用(0.01 ml/g)。复方地芬诺酯(康普药业，1109027)混悬液：2片复方地芬诺酯片(2.5 mg/片)研磨成粉，加入2.5 ml水均匀混合。肠通(岷宏)：用0.9%NS以正常成人0.0025 mg/d为标准配置成不同浓度悬液。0.9%NS(四药)。杜密克(荷兰Abbott Biologicals， B.VH20120387)。
1.2方法
1.2.1造模及分组 ①造模：复方地芬诺酯法：小鼠100只禁食16 h后按10 mg/kg一次灌胃。用该模型模拟临床非特异性便秘[7]，即造模后小鼠排便减少或难排便，与临床症状及诊断基本相同。以小鼠出现竖毛、少动、蜷曲、蹲伏、不进食，大便干硬，排便次数减少，粪便颗粒明显变细、变小为成功标志。NS灌胃法：小鼠20只用0.9%NS灌胃(用于空白组的造模)。造模30 min后进行分组。②分组(20只/组)：○a肠通组：高(10 mg/只)、中(5 mg/只)、低(2.5 mg/只)剂量组，相当于人体剂量的5、10、20倍，用肠通与墨汁等体积混合物进行灌胃，0.1 ml/只。○b阳性对照组：杜密克与墨汁等体积混合灌胃，67 mg/只，0.1 ml/只。○c模型组：墨汁灌胃，0.1 ml/只。④空白组：墨汁灌胃，0.1 ml/只。
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1.2.2小肠推进实验 灌胃25 min后每组立即脱颈处死小鼠10只，计算墨汁推进率[8]：剪取上自幽门、下至回盲肠部的肠管为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”[7];取小肠标本做病理学检查。墨汁推进率(%)=墨汁推进长度(cm)/小肠总长度(cm)×100%。
1.3观察指标 观察各组的墨汁推进率、首粒排黑便时间、6 h内排黑便粒数、含水量[含水量=(湿重-干重)/湿重×100%]、有无死亡以及病理学。于小鼠幽门下15 cm空肠处剪取2 mm×3 mm肠壁，用4℃ 0.9% NS清洗后置于冷多聚甲醛-戊二醛固定液。
1.4数据处理 采用SPSS 11.0统计软件处理数据，计量资料以(x±s)表示，采用t检验。符合方差分析的数据采用单因素方差分析，非正态的数据采用Kruskal-Wallis H多组秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
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2.1肠通对便秘小鼠墨汁推进率的影响 ①小肠总长度：各组小鼠小肠总长度比较，差异无统计学意义(P>0.05)。②墨汁推进长度：空白组墨汁推进长度均大于其余各组，差异具有统计学意义(P<0.05);空白组墨汁推进长度大于肠通高剂量组，差异有统计学意义(t=5.81，P=0.00);肠通高、中、低剂量组墨汁推进长度均大于模型组，差异具有统计学意义(t=6.75，8.90，9.08;P<0.05)。③墨汁推进率：空白组墨汁推进率均大于其余各组，差异具有统计学意义(P<0.05);肠通高中低剂量组墨汁推进率有所上升，与阳性对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05);肠通高、中、低剂量组墨汁推进率均大于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。
2.2小鼠排便实验结果 ①首粒排便时间：与空白组比较，肠通高、中、低剂量组，阳性对照组，模型组的首粒排便时间均延长，差异具有统计学意义(t=7.22，7.13，6.66，7.36，9.29;P=0.00)。②6 h排便粒数：模型组6 h排便粒数少于其余各组，差异有统计学意义(P<0.05)。③排便含水量：与模型组比较，肠通高、中、低剂量组，阳性对照组的排便含水量均升高，差异具有统计学意义(t=4.40，5.27，6.19，9.84;P=0.00)，见表2。
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2.3小鼠死亡情况 各组小鼠均无死亡。
2.4组织病理学检查 各组小肠绒毛排列整齐，结构完整，见图1。
3讨论
便秘以排便困难为主要病症，可引发痔疮、肛裂等并发症，且易诱发老年人心脑血管等慢性疾病的发生发展[9，10]。随着生活水平的改善，便秘在老年人中发病率逐渐增高，其在中医学被称为“大便难”“不更衣”“脾约”“阳结”“阴结”等，病因有饮食不节、年老体弱、情绪失调、气机郁滞等，与胃、肠、肝、肾、脾、肺功能失调相关，而老年性便秘从病因、发病机制及临床症状上讲，属现代医学中的功能性便秘[11]。西医多采用服用西沙必利片、乳果糖口服液、导泻剂等，虽有一定治疗效果，但会引起一定毒副反应，如恶心、呕吐、腹泻、水电解质紊乱等[12，13]。中医多采用中药内服、针灸推拿、敷脐疗法等[14，15]，治疗方法多样，疗效确切，安全无毒副作用，中医药治疗老年性便秘的优势明显，经济适用，标本兼顾，越来越受到重视[16]。, http://www.100md.com(付满玲 庞艳 杨树娟 胡方园 杨升 周玉霞 胡月 刘珉甬)