一种肠镜润滑消泡剂的细胞毒性和遗传毒性生物学评价(3)
1.2.4体外哺乳动物细胞染色体畸变试验 将生长良好的CHL细胞调整至适宜浓度接种到培养皿中与样品溶液接触6 h和24 h,6 h接触分设+S9组和-S9组,同时用样品溶剂含10% FBS的MEM培养基作为阴性对照,用MMC和CP作为无活化系统和有活化系统的阳性对照。接触结束后用Hanks液洗涤细胞3次,加入培养基继续培养。在收获细胞前3 h加入终浓度为1 μg/ml细胞分裂中期阻断剂秋水仙素。培养结束后用胰蛋白酶液消化细胞,记录细胞数量,对细胞进行离心、低渗、清洗、固定后得到新鲜混悬液。用混悬液制片,室温下自然干燥,并用姬姆萨染液染色。在光学显微镜下,每组挑选200个中期分裂相(染色体数为2n±2)进行染色体畸变分析。记录下观察到的染色体数目和畸变类型。1.3观察指标 细胞毒性试验结果、Ames试验结果、计算SG、RTG、PE0、PE2和MF;计算相对细胞增长数、细胞畸变数和染色体结构异常百分率。根据OECD标准中的GEF因子规定,若样品组MF值即突变频率与阴性对照组相比超过126×10-6的增长,则判断样品结果为阳性[4]。
1.4统计学方法 采用SPSS 24.0统计软件对染色体畸变数进行统计分析 ......
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