ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ试剂盒性能评价(2)
1材料与方法
1.1 材料 ①hs-cTnⅠ低值样品组：收集无心血管、肝、胆、肾、肺等器质性疾病，心电图检查正常，无急性炎症，半年内均无大手术、输血史，血脂、血清肌酐等正常，查询资料半年内均无心血管事件发生的表面健康人60名的血浆，年龄18～78岁，其中男30人，女30人。②hs-cTnⅠ高值样品组：收集广州医科大学附属第二医院2018年8月～11月疑似或确诊AMI患者样本50例，样本无黄疸、溶血、脂血。
1.2方法
1.2.1标本采集 收集当天符合要求的标本，分离血浆于EP管中，至于-20℃冰箱中保存，仅冻融1次。
1.2.2仪器和试剂 仪器为雅培i2000化学发光免疫分析仪，使用配套hs-cTnⅠ试剂盒。
1.2.3精密度评估 根据EP15-A2文件《用户对精密度和正确度性能的验证试验》。将健康者hs-cTnⅠ低值新鲜血浆混合后测出浓度为0.003 μg/L，分装5管，每管800 μL;hs-cTnⅠ高值标本同理，混合后浓度大约5 μg/L。在仪器运行正常、质控在控的情况下，每天分析1个批次，高、低值2个浓度，每个浓度重复测量3次，连续测量5 d，记录数据，计算均值、标准差、批内不精密度及总不精密度。
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1.2.4正确度评估 根据CLSI的EP15-A2《用户对精密度和正确度性能的验證试验》文件，将已知浓度校准液(校准液1浓度为10 μg/L;校准液2浓度为50 μg/L)分别加入患者样本(患者样本浓度为4.118 μg/L)中，成为回收样本1、回收样本2，原患者样本加入相同量的无分析物溶液(健康者血浆样本)作基础样本。样本制备方式如下：①基础样本：患者标本0.9 ml+健康者标本0.1 ml;②回收样本1：患者标本0.9 ml+校准液1(10 μg/L)0.1 ml;③回收样本2：患者标本0.9 ml+校准液2(50 μg/L)0.1 ml，每个样本各测3次，计算回收率。
1.2.5空白限(LoB)评估 CLSI的EP17-A《确定检出限和定量检出限方案》确定LoB。生理盐水做为空白样本每天下午测定一批生理盐水，每批重复测定3次，连续测5 d。因仪器直接报告的是浓度值，hs-cTnⅠ浓度值在低值时往往不呈正态分布，因而采用非参数方法估算第95百分位数[3]。即将数据由小到大排列，第95百分位数所在位置为空白样品总数×(95/100)+0.5。
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1.2.6线性范围评估 根据CLSI的EP6-A《定量测量程序的线性评价：统计学方法》文件，取已知浓度的hs-cTnⅠ低值(浓度为0.002 μg/L)和高值(浓度为61.377 μg/L)血浆各1份，并按照高值：低值比例为5：1、2：1、1：1、1：2、1：5混成不同浓度值的血浆5份，加上低值、高值血浆共7份，每个样本测定2次，计算实际测得平均值，同时根据样本稀释方案计算预期值，后进行相关回归统计分析。
1.2.7生物参考区间评估 选择表面健康人(入选标准与低值样本组相同)血浆，其中男性30人，女性30人，60个检测数据如果不能在同一天获得，则当天留取的标本当天测定。按标准操作规程进行检测并对所得结果逐一验证是否在现有的参考区间内，若实验对象的测定值有95%以上在所选择的参考区间内，可以接受。否则，需建立合适的参考区间。
2结果
2.1精密度评估 高(5.702 μg/L)、低(0.003 μg/L)两个浓度混合血浆的批内不精密、总的不精密度符合要求，见表1。
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2.2正确度评估 hs-cTnⅠ的平均回收率为97.50%，见表2。
2.3空白检出限评估 空白样本的检测结果呈非正态分布，故用非参数程序估计LoB，即估计第95%分位数的值，LoB=30×(95/100)+0.5=29位置的结果。将30个空白检测值由小到大排序，第29位置的结果为0.001 μg/L，即LoB=0.001 μg/L。在厂家声明的LoB范围(0.0007～0.0013μg/L)之内，见表3。
2.4线性范围评估 测定值为2次测定结果的平均值，与理论值做线性对比，通过计算、拟合，得出线性方程为Y=1.0006X-0.13136，R2=0.9999。线性样本检测结果见表4，线性曲线见图1。
2.5生物参考区间评估 按NCCLS C28-A2 推荐方法，验证现厂家提供的生物参考区间。根据测定结果显示，男性100.00%(30/30)的表面健康个体的检测结果落在现用生物参考区间的内，女性97.60%(29/30)的表面健康个体的检测结果落在参考区间内，说明厂家声明的生物参考区间有效，适用于本实验室，见表5。
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3 讨论
肌钙蛋白是疑似急性冠脉综合征患者危险分层及心肌梗死诊断的首选生物标志物，截断值为第99百分位值。高敏肌钙蛋白可检测轻微的心肌损伤，可帮助临床更早诊断及决定治疗方案[1]。ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ作为第三代高敏肌钙蛋白检测方法，在低于第99百分位值时可检出的表观健康人群比例达96%，其试剂盒在临床实验室中使用是否可达到厂家声明的性能指标，在使用前必须按要求进行评价、验证。
精密度可以反映分析过程中随机误差的大小，是仪器整体性能首要指标，是临床检验的方法评价重要指标之一[4]。它是进行其他性能验证实验的前提，良好的精密度和准确度可为临床检测标本及后续实验提供合理可靠的检测结果。本实验结果显示，高值样本混合血浆的批内不精密和总的不精密度CV分别1.56%和1.27%，低值样本混合血浆的批内不精密和总不精密度CV均为0 。与厂家声明的室内不精密度CV≤10%对比，符合要求，该试剂盒具有良好的精密度，同时也保证了后面所展开的实验的合理可靠性。, 百拇医药(习浩 刘荣静)
1.1 材料 ①hs-cTnⅠ低值样品组：收集无心血管、肝、胆、肾、肺等器质性疾病，心电图检查正常，无急性炎症，半年内均无大手术、输血史，血脂、血清肌酐等正常，查询资料半年内均无心血管事件发生的表面健康人60名的血浆，年龄18～78岁，其中男30人，女30人。②hs-cTnⅠ高值样品组：收集广州医科大学附属第二医院2018年8月～11月疑似或确诊AMI患者样本50例，样本无黄疸、溶血、脂血。
1.2方法
1.2.1标本采集 收集当天符合要求的标本，分离血浆于EP管中，至于-20℃冰箱中保存，仅冻融1次。
1.2.2仪器和试剂 仪器为雅培i2000化学发光免疫分析仪，使用配套hs-cTnⅠ试剂盒。
1.2.3精密度评估 根据EP15-A2文件《用户对精密度和正确度性能的验证试验》。将健康者hs-cTnⅠ低值新鲜血浆混合后测出浓度为0.003 μg/L，分装5管，每管800 μL;hs-cTnⅠ高值标本同理，混合后浓度大约5 μg/L。在仪器运行正常、质控在控的情况下，每天分析1个批次，高、低值2个浓度，每个浓度重复测量3次，连续测量5 d，记录数据，计算均值、标准差、批内不精密度及总不精密度。
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1.2.4正确度评估 根据CLSI的EP15-A2《用户对精密度和正确度性能的验證试验》文件，将已知浓度校准液(校准液1浓度为10 μg/L;校准液2浓度为50 μg/L)分别加入患者样本(患者样本浓度为4.118 μg/L)中，成为回收样本1、回收样本2，原患者样本加入相同量的无分析物溶液(健康者血浆样本)作基础样本。样本制备方式如下：①基础样本：患者标本0.9 ml+健康者标本0.1 ml;②回收样本1：患者标本0.9 ml+校准液1(10 μg/L)0.1 ml;③回收样本2：患者标本0.9 ml+校准液2(50 μg/L)0.1 ml，每个样本各测3次，计算回收率。
1.2.5空白限(LoB)评估 CLSI的EP17-A《确定检出限和定量检出限方案》确定LoB。生理盐水做为空白样本每天下午测定一批生理盐水，每批重复测定3次，连续测5 d。因仪器直接报告的是浓度值，hs-cTnⅠ浓度值在低值时往往不呈正态分布，因而采用非参数方法估算第95百分位数[3]。即将数据由小到大排列，第95百分位数所在位置为空白样品总数×(95/100)+0.5。
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1.2.6线性范围评估 根据CLSI的EP6-A《定量测量程序的线性评价：统计学方法》文件，取已知浓度的hs-cTnⅠ低值(浓度为0.002 μg/L)和高值(浓度为61.377 μg/L)血浆各1份，并按照高值：低值比例为5：1、2：1、1：1、1：2、1：5混成不同浓度值的血浆5份，加上低值、高值血浆共7份，每个样本测定2次，计算实际测得平均值，同时根据样本稀释方案计算预期值，后进行相关回归统计分析。
1.2.7生物参考区间评估 选择表面健康人(入选标准与低值样本组相同)血浆，其中男性30人，女性30人，60个检测数据如果不能在同一天获得，则当天留取的标本当天测定。按标准操作规程进行检测并对所得结果逐一验证是否在现有的参考区间内，若实验对象的测定值有95%以上在所选择的参考区间内，可以接受。否则，需建立合适的参考区间。
2结果
2.1精密度评估 高(5.702 μg/L)、低(0.003 μg/L)两个浓度混合血浆的批内不精密、总的不精密度符合要求，见表1。
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2.2正确度评估 hs-cTnⅠ的平均回收率为97.50%，见表2。
2.3空白检出限评估 空白样本的检测结果呈非正态分布，故用非参数程序估计LoB，即估计第95%分位数的值，LoB=30×(95/100)+0.5=29位置的结果。将30个空白检测值由小到大排序，第29位置的结果为0.001 μg/L，即LoB=0.001 μg/L。在厂家声明的LoB范围(0.0007～0.0013μg/L)之内，见表3。
2.4线性范围评估 测定值为2次测定结果的平均值，与理论值做线性对比，通过计算、拟合，得出线性方程为Y=1.0006X-0.13136，R2=0.9999。线性样本检测结果见表4，线性曲线见图1。
2.5生物参考区间评估 按NCCLS C28-A2 推荐方法，验证现厂家提供的生物参考区间。根据测定结果显示，男性100.00%(30/30)的表面健康个体的检测结果落在现用生物参考区间的内，女性97.60%(29/30)的表面健康个体的检测结果落在参考区间内，说明厂家声明的生物参考区间有效，适用于本实验室，见表5。
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肌钙蛋白是疑似急性冠脉综合征患者危险分层及心肌梗死诊断的首选生物标志物，截断值为第99百分位值。高敏肌钙蛋白可检测轻微的心肌损伤，可帮助临床更早诊断及决定治疗方案[1]。ARCHETECT高敏肌钙蛋白Ⅰ作为第三代高敏肌钙蛋白检测方法，在低于第99百分位值时可检出的表观健康人群比例达96%，其试剂盒在临床实验室中使用是否可达到厂家声明的性能指标，在使用前必须按要求进行评价、验证。
精密度可以反映分析过程中随机误差的大小，是仪器整体性能首要指标，是临床检验的方法评价重要指标之一[4]。它是进行其他性能验证实验的前提，良好的精密度和准确度可为临床检测标本及后续实验提供合理可靠的检测结果。本实验结果显示，高值样本混合血浆的批内不精密和总的不精密度CV分别1.56%和1.27%，低值样本混合血浆的批内不精密和总不精密度CV均为0 。与厂家声明的室内不精密度CV≤10%对比，符合要求，该试剂盒具有良好的精密度，同时也保证了后面所展开的实验的合理可靠性。, 百拇医药(习浩 刘荣静)