大黄酚通过TLR4/NF-kB信号通路途径调控小胶质细胞炎性反应(3)
1.3.7免疫荧光检测不同浓度大黄酚对NF-κB蛋白位置的影响 取出各组样本(12孔板),用 PBS洗涤2次(1 ml,3 min)。常温用1 ml 4%多聚甲醛固定约30 min,加入1 ml 0.5%Triton X-100室温通透 20 min,PBS洗涤后加入1 ml 5%BSA,在37℃条件下封闭1 h。滴加一抗即兔抗多克隆NF-kB p65抗体(1∶200)4 ℃过夜,Alexa Fluor 594标记羊抗兔IgG(1∶100)37 ℃ 1 h,加入300 μl抗荧光淬灭封片液(含DAPI)防淬灭剂封片,倒置荧光显微镜下观察,采集5个视野图片。采用Image pro plus6.0软件计算NF-κB核转移数。1.4统计学分析 应用SPSS 20.0软件进行统计数据分析,数据使用(x±s)表示,组间比较用采用单因素方差分析,P<0.05表示差异有统计学意义,P<0.01表示统计学意义显著。
2结果
2.1各组小胶质细胞存活率 CCK法检查结果示,与空白组比较,100 μg/ml大黄酚预处理组的细胞存活率明显降低(P<0.05) ......
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