周 辉，沈伟锋，邵平扬

    (嘉兴市第一医院检验科，浙江 嘉兴 314001)

    微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度为19～25 个核苷酸的单链非编码RNA，能够通过与靶基因的3′端非翻译区(3′-UTR)特异结合，促进目标mRNA 降解或抑制其翻译。miRNA 能够调节细胞中约30%的mRNA 的表达，在细胞分化、增值和凋亡等各种生物学过程中发挥重要作用[1]。研究发现[2]，许多miRNA 与癌症的发生发展密切相关，在细胞内发挥了促癌或者抑癌的作用。外泌体是由细胞内吞泡膜向内凹陷形成的多泡小体与细胞膜融合后释放到细胞外的小囊泡，直径为30～150 nm，广泛存在于各种体液中[3，4]。在肿瘤微环境中，通过外泌体传递蛋白质、脂质、mRNA 和miRNA 等物质是除了分泌细胞因子、趋化因子和生长因子等可溶性介质外细胞间通讯的重要方式[5，6]。胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，根据世界卫生组织报告[7]，胃癌是全球发病率第5 高、致死率第3 高的癌症，2018 年全球新发胃癌病例超过100 万例，同时因胃癌致死病例超过78.3 万例。中国是胃癌高发国家，其发病率和致死率均仅次于肺癌[8]。淋巴结转移是胃癌最常见的转移形式，其发生率随肿瘤浸润深度的增加而提高[9]。淋巴结转移阳性胃癌患者5 年无复发生存率仅为53%[10，11]。缺氧是包括胃癌在内所有实体瘤一种普遍和持续存在的共同特征，对肿瘤的发生发展起着至关重要的作用[12]。缺氧不但能够促进胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力，还会促进胃癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions，EMT)和对化疗药物耐受[13-15]。本研究通过分析缺氧诱导的SGC-7901 胃癌细胞系来源的外泌体传递miRNA 对常氧胃癌细胞的作用，揭示外泌体在缺氧微环境中对胃癌侵袭和转移的作用，现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂和仪器 人胃腺癌细胞系SGC-7901(中国科学院上海细胞库)；RPMI-1640 培养基(Hyclone)；胎 牛 血 清(fetal bovineserum，FBS)(Hyclone)；无外泌体培养基Exo-clearTM Complete Growth Medium(SBI)；外泌体提取试剂ExoQuick-TCTM Exosome Precipitation Solution(SBI)；Celltracker CM-DiI 活细胞示踪剂(上海翊圣)；miR-199a-5p 类似物(miR-199a-5p mimics) 和miR-199a-5p 类似物阴性对照(miR-199a-5p mimicsNC)(委托上海吉玛生物公司合成)；lipofectamine 2000(Thermo Fisher Scientific)；JEM-1230 透射电子显微镜(JEOL)；3311 型CO2细胞培养箱(Thermo Fisher)；CKX41 光学倒置显微镜(Olympus)、NanoDrop超微量分光光度仪(Thermo Fisher)、StepOne Plus 荧光定量PCR 仪(ABI)；G:BOX 系列智能荧光、化学发光成像系统(Syngene)、垂直电泳仪(BIO-Rad) ......