全血ＰＣＲ直接扩增技术在亚甲基四氢叶酸还原酶基因Ｃ677Ｔ多态性分析中的应用(2)
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2 结果
2.1 全血和基因组DNA的MTHFR C677T基因型分析
分别对同一个体的全血样本采用以Cocktail PCR Buffer为缓冲体系的全血PCR直接扩增技术和提取的基因组DNA采用传统PCR技术扩增MTHFR目的片段，随后以RFLP测定MTHFR C677T基因型，结果见表1，酶切电泳图谱见图1。应用Kappa检验分析了上述两种方法测定结果的一致性，Kappa=0.946，95%可信区间为0.906～0.985，表明这两种方法检测MTHFR C677T基因型具有高度一致性。随机抽取基因组模板和对应的全血模板的PCR产物共10例进行测序，两种方法检测的基因型与测序结果完全吻合，测序结果见图2所示，说明以全血为模板、以Cocktail PCR Buffer为缓冲体系的全血PCR直接扩增技术与传统PCR方法检测结果是一致的。
2.2 遗传平衡检验
对提取的基因组DNA采用PCR-RFLP技术测定的MTHFR C677T各基因型频率作Hardy-Weinberg遗传平衡的χ2检验，结果显示MTHFR C677T各基因型频率与期望值基本吻合，符合Hardy-Weinberg遗传平衡(χ2=0.205，P>0.05)。
2.3 同种族不同地区MTHFR C677T基因型的分布特征
对9个中国大陆不同地区的MTHFR C677T多态性研究与对淮安地区205例健康汉族个体的MTHFR C677T传统PCR-RFLP法分型结果共同分析，进行不同地区的中国汉族人群MTHFR C677T位点多态性分布频率的比较，各地区资料见表2。结果表明，不同地区汉族人群的MTHFR 677T等位基因频率差异有显著性，χ2=97.162；随人群居住地理位置由高纬度至低纬度MTHFR 677T等位基因频率逐渐降低 ......
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