氡及其子体诱发大鼠体细胞ＨＰＲＴ基因位点的突变(2)
 |
| 第1页 |
参见附件(257KB，3页)。
1.3.2 HPRT基因突变频率的计算 每个样本计数2 000个转化淋巴细胞(其中加与不加6-TG各计数1 000个)中的双核或多核淋巴细胞数。将含6-TG的1 000个转化淋巴细胞中双核或多核细胞数除以不含6-TG的1 000个转化淋巴细胞中双核或多核细胞数，所得结果为HPRT基因位点突变频率(MFs，‰)。
1.4 大鼠气管-支气管上皮细胞HPRT基因位点突变频率的检测
1.4.1 大鼠气管-支气管上皮细胞的分离与培养 大鼠麻醉后，无菌条件下暴露气管和肺，环状软骨下方插管，生理盐水灌洗3 次，下端在左右肺门处结扎，去除肺组织，然后灌入1 %链酶蛋白酶，结扎上端，4 ℃过夜，置于90 mm培养皿中，用Ham’sF12 培养基冲洗气管-支气管，再剪开气管-支气管，用细胞刷充分刷洗，4 号针头收集培养皿中的刷洗液，离心洗涤收集细胞。详见参考文献[2]。
1.4.2 HPRT基因突变频率的检测 收集上述得到的大鼠气管-支气管上皮细胞，制成细胞悬液，以1×105个细胞/ml接种于无血清完全F12培养基中，每个样本接种2个培养皿，于其中一个培养皿中加入6-TG ，终浓度为1×10-5 mol/L，置于37 ℃，5% CO2培养箱中培养56 h，加入Cyt-B，终浓度为6 μg/ml，再继续培养40 h。弃培养液，收集贴壁细胞，离心，固定，制片。
1.4.3 HPRT基因突变频率的计算 同“1.3.2”。
1.5 统计分析
不同剂量诱发HPRT基因突变率间的比较采用秩和检验法 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(257KB，3页)。