Ｔａｑｍａｎ荧光定量ＰＣＲ是核酸水平对管家基因ＧＡＰＤＨ进行定量的好方法

http://www.100md.com 2006年4月1日 王 萍 丛 敏 李忆梅 唐淑珍 刘晓明 王宝恩 贾继东 尤

第1页

    参见附件(265KB，4页)。

     [摘要] 目的 比较Taqman荧光定量PCR法、SYBR GteenI荧光定量PCR法和普通PCR法制作3-磷酸甘油醛(GAPDH)标准曲线的检出下限、线性范围的差异，确定一种较好的GAPDH绝对定量方法。方法 构建含GAPDH全长的质粒，经PCR和EcoRI限制性酶切鉴定确认后，紫外定量并连续稀释10倍作为标准品。分别用Taqman法和SYBRGreenI法于荧光定量PCR仪上制作标准曲线，同时用普通PCR结合琼脂糖凝胶电泳利用Quantlty One软件定量并制作标准曲线。结果 Taqman法检出GAPDH的下限为2.0×10⁴拷贝，线性范围：2.0×10⁴~2.0×10¹⁰拷贝；SYBR Green I法检出GAPDH的下限为2.0×107拷贝，线性范围：2.0×10⁷～2.0×10¹⁰拷贝；普通PCR检出GAPDH的下限为2.0×10⁶拷贝，线性范围：2.0×10⁷~2.0×10<sup>9/sup>拷贝。结论 Taqman荧光定量PCR法比SYBRGreenI荧光定量PCR法和普通PCR法的灵敏度高，线性范围宽，是核酸水平对GAPDH定量的好方法。

    [关键词] PCR；GAPDH；荧光定量

    [中图分类号] Q 502</sup>

    http://www.100md.com/html/paper/1006-7795/2006/02/18.htm

您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(265KB，4页)。