正交试验法优选七君颗粒提取工艺
摘要：目的：以三七皂苷R1、人参皂苷Rgl的含量为指标，研究七君颗粒中三七、人参等10味中药的提取工艺。方法：采用正交试验设计法，对七君颗粒水提取工艺进行考察，用高效液相色谱法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rgl含量。结果：加水量12倍，煎煮1次，煎煮时间每次90min，所得提取液中三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl的含量高。结论：此工艺对三七皂苷R1、人参皂苷Rgl的含量的提取率高，稳定性好，可作为七君颗粒的提取工艺。
关键词：七君颗粒；三七皂苷R1；人参皂苷Rgl;提取；正交试验
中图分类号：R284.2
文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2007)09-0037-02
七君颗粒由三七、人参、金钱草等10味中药组成，具有通络渗湿，健脾化痰之功，临床适用于痰湿瘀阻经脉型高尿酸血症。方中三七为君药，有化瘀止血、活血定痛之功，现代研究表明。它具有止血与活血化瘀双重作用。本文采用正交设计法，考察加水量、煎煮次数、煎煮时间及三者交互作用对提取效果的影响，以三七皂苷R1、人参皂苷Rgl的含量为指标，确定七君颗粒中水提取部分最佳提取工艺。
, 百拇医药
1 仪器与材料
1.1 仪器美国Agilentll00系列色谱仪(配自动进样装置，柱温箱)，色谱柱Agilent C18 SB 4.6×250mm，5μm；柱温：25℃；流速：100ml/min；FA1004型电子天平(上海天平仪器厂)，SJN-500型三效节能浓缩器(浙江瓯海制药机械厂).煎药器，量杯、量筒，盛药器等。
1.2 材料无水乙醇、甲醇、三七皂苷R1对照品(中国药品生物制品检定所117045-200312供含量测定用)、人参皂苷Rgl(中国药品生物制品检定所0703-200221供含量测定用)，由云南省药检所提供；药材购自于云南省药材公司。
2 实验方法与结果
2.1 正交试验设计试验选择影响水提效果的主要因素：加水量、煎煮次数、煎煮时间为考察对象，并结合生产实际，每个因素确定不同的水平，用Lg(34)正交表进行实验。实验因素水平安排。
, 百拇医药
2.2 提取工艺过程按处方量取三七、人参等药，合计156g，以水先浸泡12h，分别按Lg(34)正交试验进行水煎煮提取，合并提取液滤过，浓缩并定容至100ml量瓶中，作为样品液。
2.3 指标测定方法
2.3.1 含量测定指标三七皂苷Rl和人参皂苷Rgl。
2.3.2 方法采用高效液相色谱法。
2.3.3 供试品溶液的制备取本品25ml，置25ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，混匀，放置使沉淀，滤过，精密量取续滤液20ml，蒸至约6ml，通过D101型大孔吸附树脂拄(直径1.5cm，长14cm)，用水100ml洗脱，弃取水洗脱液，再用20%乙醇25ml洗脱，弃取20%乙醇洗脱液，继用80%乙醇100ml洗脱，收集80%乙醇洗脱液，水浴上蒸干，残渣用甲醇定量转移至5ml量瓶中，混匀，滤过，取续滤液，即得。
, http://www.100md.com
2.3.4 对照品溶液的制备精密称取三七皂苷R1对照品(中国药品生物制品检定所117045-200312供含量测定用)3.2mg和精密称取人参皂苷Rgl(中国药品生物制品检定所0703-200221供含量测定用)12.0mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并至刻度，混匀，得含三七皂苷R1 0.32mg/ml和含人参皂苷Rgl 1.2mg/ml的混合溶液。
2.3.5 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈一水(21:79)为流动相，检测波长为203cm。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算，应不低于6000。
2.3.6 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl(对照品溶液5μl，供试品溶液10μl)，注入液相色谱仪，测定，即得。对照品溶液连续进样3次，三七皂苷R1的RSD＝0.59%，人参皂苷Rgl的RSD＝0.51%；理论板数按人参皂苷Rgl峰计算，均在10000以上。
, 百拇医药
2.4 数据处理分别把三七皂苷R1、人参皂苷Rgl两项含量最好的指标定为100分，每项按比例进行综合评分，鉴于在本实验中，三七皂苷R1比人参皂苷Rgl重要，故权重系数分别取为0.7、0.3进行加权求和，Lg(34)计算结果。
2.5 结果分析从表2的R值可知，影响提取效果的因素顺序为：煎煮时间(c)>加水量(A)>煎煮次数(B)，经表3的方差分析得出各因素对试验结果均无显著性影响。直观分析结果表明较佳提取工艺条件为Lg(34)。结合成本考虑，该结果符合生产实际需要，故确定其提取工艺条件为Lg(34)即加水量为12倍，煎煮1次，煎煮时间为每次90min。
3 讨论
方中君药三七主要含皂甙类活性成分三七皂苷R1和人参皂苷Rgl等在水、乙醇中都具有较好的溶解性Ⅲ，考虑到成本及条件的限制，故本试验选择水煎提取，高效液相色谱法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rgl含量作为实验指标。实验数据的极差分析表明，七君颗粒在水提过程中，煎煮时间是影响水提效果的主要因素。为了保证有效成分的溶出，颗粒水提部分的制备拟采用先浸泡12h，加12倍量水，煎煮1次，煎煮时间为每次1.5h。一般说来，水提过程中，加水量、煎煮时间、煎煮次数的增加及浸泡时间的延长有助于药物中有效成分的溶出，但由于三七中含有大量淀粉，煎煮时间过长、煎煮次数多易于糊化，因此，在水提取过程中煎煮时间、次数不宜过长、过多。七君颗粒为复方制剂，所含成分复杂，由于时间和条件的限制，仅选择了水提取、高效液相色谱法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rgl含量作评价指标。处方中究竟以何种成分作为理想的评价指标以及其含量测定方法还有待进一步的研究。但总的说来本试验的制备工艺是完全可行的。并具有简便、实用和经济科学的特点。, 百拇医药(李兆福 彭江云 刘路明)
关键词：七君颗粒；三七皂苷R1；人参皂苷Rgl;提取；正交试验
中图分类号：R284.2
文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2007)09-0037-02
七君颗粒由三七、人参、金钱草等10味中药组成，具有通络渗湿，健脾化痰之功，临床适用于痰湿瘀阻经脉型高尿酸血症。方中三七为君药，有化瘀止血、活血定痛之功，现代研究表明。它具有止血与活血化瘀双重作用。本文采用正交设计法，考察加水量、煎煮次数、煎煮时间及三者交互作用对提取效果的影响，以三七皂苷R1、人参皂苷Rgl的含量为指标，确定七君颗粒中水提取部分最佳提取工艺。
, 百拇医药
1 仪器与材料
1.1 仪器美国Agilentll00系列色谱仪(配自动进样装置，柱温箱)，色谱柱Agilent C18 SB 4.6×250mm，5μm；柱温：25℃；流速：100ml/min；FA1004型电子天平(上海天平仪器厂)，SJN-500型三效节能浓缩器(浙江瓯海制药机械厂).煎药器，量杯、量筒，盛药器等。
1.2 材料无水乙醇、甲醇、三七皂苷R1对照品(中国药品生物制品检定所117045-200312供含量测定用)、人参皂苷Rgl(中国药品生物制品检定所0703-200221供含量测定用)，由云南省药检所提供；药材购自于云南省药材公司。
2 实验方法与结果
2.1 正交试验设计试验选择影响水提效果的主要因素：加水量、煎煮次数、煎煮时间为考察对象，并结合生产实际，每个因素确定不同的水平，用Lg(34)正交表进行实验。实验因素水平安排。
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2.2 提取工艺过程按处方量取三七、人参等药，合计156g，以水先浸泡12h，分别按Lg(34)正交试验进行水煎煮提取，合并提取液滤过，浓缩并定容至100ml量瓶中，作为样品液。
2.3 指标测定方法
2.3.1 含量测定指标三七皂苷Rl和人参皂苷Rgl。
2.3.2 方法采用高效液相色谱法。
2.3.3 供试品溶液的制备取本品25ml，置25ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，混匀，放置使沉淀，滤过，精密量取续滤液20ml，蒸至约6ml，通过D101型大孔吸附树脂拄(直径1.5cm，长14cm)，用水100ml洗脱，弃取水洗脱液，再用20%乙醇25ml洗脱，弃取20%乙醇洗脱液，继用80%乙醇100ml洗脱，收集80%乙醇洗脱液，水浴上蒸干，残渣用甲醇定量转移至5ml量瓶中，混匀，滤过，取续滤液，即得。
, http://www.100md.com
2.3.4 对照品溶液的制备精密称取三七皂苷R1对照品(中国药品生物制品检定所117045-200312供含量测定用)3.2mg和精密称取人参皂苷Rgl(中国药品生物制品检定所0703-200221供含量测定用)12.0mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并至刻度，混匀，得含三七皂苷R1 0.32mg/ml和含人参皂苷Rgl 1.2mg/ml的混合溶液。
2.3.5 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈一水(21:79)为流动相，检测波长为203cm。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算，应不低于6000。
2.3.6 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl(对照品溶液5μl，供试品溶液10μl)，注入液相色谱仪，测定，即得。对照品溶液连续进样3次，三七皂苷R1的RSD＝0.59%，人参皂苷Rgl的RSD＝0.51%；理论板数按人参皂苷Rgl峰计算，均在10000以上。
, 百拇医药
2.4 数据处理分别把三七皂苷R1、人参皂苷Rgl两项含量最好的指标定为100分，每项按比例进行综合评分，鉴于在本实验中，三七皂苷R1比人参皂苷Rgl重要，故权重系数分别取为0.7、0.3进行加权求和，Lg(34)计算结果。
2.5 结果分析从表2的R值可知，影响提取效果的因素顺序为：煎煮时间(c)>加水量(A)>煎煮次数(B)，经表3的方差分析得出各因素对试验结果均无显著性影响。直观分析结果表明较佳提取工艺条件为Lg(34)。结合成本考虑，该结果符合生产实际需要，故确定其提取工艺条件为Lg(34)即加水量为12倍，煎煮1次，煎煮时间为每次90min。
3 讨论
方中君药三七主要含皂甙类活性成分三七皂苷R1和人参皂苷Rgl等在水、乙醇中都具有较好的溶解性Ⅲ，考虑到成本及条件的限制，故本试验选择水煎提取，高效液相色谱法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rgl含量作为实验指标。实验数据的极差分析表明，七君颗粒在水提过程中，煎煮时间是影响水提效果的主要因素。为了保证有效成分的溶出，颗粒水提部分的制备拟采用先浸泡12h，加12倍量水，煎煮1次，煎煮时间为每次1.5h。一般说来，水提过程中，加水量、煎煮时间、煎煮次数的增加及浸泡时间的延长有助于药物中有效成分的溶出，但由于三七中含有大量淀粉，煎煮时间过长、煎煮次数多易于糊化，因此，在水提取过程中煎煮时间、次数不宜过长、过多。七君颗粒为复方制剂，所含成分复杂，由于时间和条件的限制，仅选择了水提取、高效液相色谱法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rgl含量作评价指标。处方中究竟以何种成分作为理想的评价指标以及其含量测定方法还有待进一步的研究。但总的说来本试验的制备工艺是完全可行的。并具有简便、实用和经济科学的特点。, 百拇医药(李兆福 彭江云 刘路明)