肠病及肺的微生态学研究
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摘要：目的：采用微生态学的研究方法探讨“肠病及肺”的机理。方法：建立大鼠便秘模型，观察其结肠和肺部微生态变化。结果：便秘模型组的肠道需氧菌、真菌、大肠杆菌较正常对照组显著增多(P<0.01)，而厌氧菌、类杆菌和双歧杆菌显著减少(P<0.01)；同时，便秘模型组的肺部需氧菌增多，厌氧菌显著减少(P<0.05)，真菌显著增多(P<0.01)。结论：肺肠微生态学上的菌群对应规律性变化可能是“肠病及肺”的机制之一。
关键词：肺与大肠相表里；肠病及肺；便秘；微生态学
中图分类号：R37文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2011)03-0054-02
“肺与大肠相表里”的理论源于《内经》，肺与大肠不仅在生理上相互联系，病理上相互影响，治疗上也相互为用(肺病治肠、肠病治肺、肺肠合治)。笔者参照文献[1]方法，建立大鼠便秘模型，并对结肠和肺组织进行微生态学观察，研究‘肠病及肺’的生物学机制。
1材料与方法
1.1实验动物SPF级Wistar雄性大鼠40只，体重(180±20)g，购自成都达硕生物科技有限公司(动物合格证号：scxk(m)2008-15)，标准饲料喂养。
1.2药物及试剂复方地芬诺酯片(DC)(批号：09033001，焦作博爱药业)；阿拉伯树胶粉(进口分装)(炭粉液的配制：阿拉伯树胶50g，加水400mL煮沸至溶液透明，称取活性碳末25g，加至上述溶液中煮沸3次，待溶液凉后加水定容至500mL，于4℃冰箱保存，临用前摇匀)。
1.3主要仪器及设备ACS-3C型电子天平(广州)；BL-420F型生物机能实验系统(成都)；OLYMPUSBX60光学显微镜(日本)；OLYMPUSDP70彩色图文系统(日本)。
1.4大鼠便秘模型制作予复方地芬诺酯片灌胃，剂量10mg/kg，1次/日，30min后再灌炭粉指示液，造模后记录大鼠排出首粒黑便的时间和在6h内排出粪便的粒数及重量，共1周。
1.5肺肠微生态学检测收集支气管肺泡灌洗液进行肺部细菌检测，支气管肺泡灌洗液收集方法：大鼠麻醉后，取仰卧位，固定架上固定，打开胸腔，暴露气管，V型切口切开，插管，用0.02%PBS灌洗肺脏5～6次，收集灌洗液，以1500r/min离心5min，取上清液4℃保存待测。取新鲜的粪便1粒即刻放入制备好的转移液中，做菌群的培养、计数和种类鉴别观察。转移液的制备及具体检测程序参照文献[2]进行。
1.6统计学方法实验数据以(Ax-G±s)形式表示，采用SPSS16.0统计软件包进行分析，行组间配对t检验，以P<0.05为有统计学意义。
2结果
2.1大鼠DC便秘模型的复制实验观察发现，模型大鼠的一般生物学特征为，不同程度出现腹胀状态，懒动、少食，倦怠蜷缩，被毛蓬松无泽，活动减少，反应迟缓，体重明显减轻，摄食量减少。解便次数减少，排便较对照组困难，粪便的外观明显变小，质地干硬，粒数减少、干湿重量均减轻(P<0.05)，表明造模成功，见表1。
病理切片[KG-*3]HE染色光镜观察发现，正常对照组大鼠结肠黏膜完好，无炎细胞浸润及溃疡形成，黏膜上皮完整、连续，腺体排列规则，结构清楚；便秘模型组大鼠结肠表现为局部充血、水肿、黏膜轻度糜烂；结肠黏膜上皮欠完整，腺体排列欠规则，黏膜腺体破坏，残存的黏膜充血、水肿，黏膜及黏膜下大量炎细胞浸润。
2.2大鼠肠道菌群检测结果观察结肠微生态的变化，结果显示，便秘模型组的肠道需氧菌、真菌、大肠杆菌较正常对照组显著增多(P<0.01)，而厌氧菌、类杆菌和双歧杆菌显著减少(P<0.01)。见表2。
2.3大鼠肺部菌群检测结果便秘模型组的肺部需氧菌增多，但无统计学意义，厌氧菌显著减少(P<0.05)，真菌显著增多(P<0.01)。见表3。
3讨论
“肺与大肠表里”理论起源于《黄帝内经》，《灵枢•本输》云：“肺合大肠，大肠者，传导之府”。肺与大肠脏腑相表里，经脉相互属络。在生理学中，传统上认为肺是呼吸器官，大肠是消化器官，二者的活动均由神经-内分泌系统调节控制，没有直接的关联。随着现代研究对肺的非呼吸功能、肠的非消化吸收功能的揭示，二者之间直接联系的途径不断被发现，并日益变得复杂。以往的实验研究，侧重于“肺病及肠”[3~4]，对“肠病及肺”研究较少，因而研究“肠病及肺”的生物学机制有重要意义。
观察发现，便秘模型组的肠道需氧菌、真菌、大肠杆菌较正常对照组显著增多，而厌氧菌、类杆菌和双歧杆菌显著减少；同时，便秘模型组的肺部需氧菌增多，厌氧菌显著减少，真菌显著增多。说明便秘模型大鼠在“肠病”的时候，其肠道菌群出现紊乱，同时，这一病理状态导致了肺部的微生态也随之发生了变化，各种类型的菌群与正常对照组比较发生了显著的改变，引起微生态失衡。
正常菌群定居于机体的特定空间，在数量上维持一定的比例，其本身不仅对机体无害，而且能通过占位效应、营养竞争、分泌抑菌或杀菌物质等，形成一道生物屏障，抵抗外来或过路的病原微生物的入侵[5]。菌群失调指定居于特定部位的正常菌群的数量及比例的改变，最常见的为肠道菌群失调，表现为肠道菌群中占绝对优势的革兰阳性杆菌减少，而革兰阴性杆菌增多，临床表现为严重腹泻及肠功能紊乱，滥用抗生素造成肠道菌群失调等，均可使肠道的潜在致病菌移位至口咽部，下行引起下呼吸道感染[6]。
微生态失衡可能导致肠道细菌移位，肠道细菌移位会引起炎症介质大量释放。肠道细菌移位是指肠道内活的细菌穿过肠道黏膜层进入固有层，继而到达肠系膜淋巴结以及更远处器官[7]。目前认为当机体应激反应过度或失调时，寄生于肠道内的微生物及其毒素，越过肠黏膜屏障，大量侵入正常情况下是无菌的肠道以外的组织，如肠壁浆膜、肠系膜淋巴结、门静脉以及其他远处器官，其结果可能引发肠源性的全身感染，并且触发SIRS甚至MODS[8]。Deitch[9]的研究认为，肠道不仅是人体内最大的贮菌所和内毒素库，而且是触发全身炎性介质释放的启动器，肠道内细菌或内毒素的移位，和胃肠道相关淋巴组织及其他肠黏膜细胞产生促炎反应释放大量促炎介质关系密切，它们共同的病理生理学基础，是肠道的缺血再灌注损伤；肠道缺血再灌注损伤后的直接结果，是损害肠黏膜屏障和激发肠道促炎反应。通过对便秘模型大鼠的微生态学研究，笔者认为，肺肠微生态学上的菌群对应规律性变化可能是“肠病及肺”的机制之一。
参考文献：
[1]高洋，温志军，杨波，等.针刺对便秘大鼠模型排便功能的影响[J].长春中医药大学学报，2008，24(3)：245~246.
[2]丁维俊，周邦靖，翟慕东，等.参苓白术散对小鼠脾虚模型肠道菌群的影响[J].北京中医药大学学报，2006，29(8)：508.
[3]靳文学，杨宇.从粘膜免疫系统看肺与大肠相表里[J].四川中医，2005，23(12)：1~2.
[4]靳文学，白亚辉，杨宇.加味升降散对过敏性哮喘豚鼠黏膜sIgA免疫影响的实验研究[J].中国中医急症，2007，16(4)：447~448 ......
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