HPLC法同时测定大籽獐牙菜中10种化学成分(1)
 |
| 第1页 |
参见附件(1830KB，3页)。
摘 要：建立反相高效液相色谱法同时测定大籽獐牙菜中10种成分的含量。方法：采用反相高效液相色谱，色谱条件为：Agilent XDB C18柱(Φ4.6×150 mm，5 μm)；流动相A：甲醇，B：水；洗脱方法：0～20 min，A为10%～30%，20～45 min A为30%～80%梯度洗脱；体积流量1.0 mL/min，检测波长254 nm，230 nm，柱温28 ℃。结果：10种成分均达到基线分离，各化合物的线性关系良好，r>0.999 5；各待测物的精密度RSD值均小于1.1%；重复性良好(RSD<3.7%)；回收率范围在97.8%～104.2%，RSD<4.2%。结论：该方法测定成分多，结果准确、可靠。
关键词：反相高效液相色谱；大籽獐牙菜；酮；环烯醚萜
中图分类号：R286.0 文献标识码：A 文章编号：1007-2349(2011)04-0064-02
大籽獐牙菜(Swertia macrosperm a C. B.Clark)系龙胆科(Gentianaceae)獐牙菜属(Swertia)植物，主要产于西藏、贵州、云南等省[1]，獐牙菜属植物多具有清肝利胆、清热除湿等功效，在民间不少地方用该属植物治疗黄疸型肝炎。张媛媛等[2]对大籽獐牙菜化学成分进行了研究，该植物中酮类、环烯醚萜类成分具有广泛的生理活性。酮类化合物具有很好的保肝、降血糖、抗氧化等作用[3~6]，裂环烯醚萜苷中的龙胆苦苷可明显降低血清转氨酶、促进肝脏的蛋白质合成，还能促进胆汁及胃液的分泌，兴奋中枢神经系统，獐芽菜苦苷具有解痉、镇痛、镇静的活性，能促进毛发生长。此外，龙胆苦苷和獐芽菜苦苷均可促进细胞胶原质的产生以及有丝分裂活动，加快创口愈合速度[7~9]。对獐牙菜属植物中齐墩果酸、龙胆苦苷、獐芽菜苦苷及酮含量的HPLC测定报道较多，杨慧玲等[10]对大籽獐牙菜中7种有效成分进行了测定。本试验建立了对大籽獐牙菜中10种成分的高效液相色谱的含量测定方法，为评价药材质量及合理用药提供了可靠依据。
1 仪器与试药
Agilent1200高效液相色谱仪，配置为自动进样器、高压四元梯度泵、DAD检测器、Agilent1200色谱工作站；Agilent XDB-C18柱(Φ4.6×150 mm d，5 μm)色谱柱；AS20500A超声波清洗器；超纯水仪。流动相用甲醇为色谱纯(美国Tedia公司)，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。断马钱子苷半缩醛内酯(S1)、表断马钱子苷半缩醛内酯(S2)、獐芽菜苷(S3)、龙胆苦苷(S4)、芒果苷(S5)、1O葡萄糖基2，3二氢1，4，6，8四羟基酮(S6)、1，3，5，6四羟基酮(S7)、2'O(3羟基苯甲酰基)獐芽菜苦苷(S8)、3，3'双(3，4二氢4甲氧基6羟基2H1苯并吡喃)(S9)、1甲氧基3，7二羟基酮(S10)10种标准对照品均由本课题组制备，纯度均在98%以上。植物样品于2009年11月采自云南省玉溪市新平县，经云南中医学院杨礼攀博士鉴定为龙胆科獐牙菜属植物大籽獐牙菜。样品阴干后粉碎过80目筛，室温下保存，植物标本存于云南民族大学民族药资源化学重点实验室标本馆。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Agilent XDB-C18(Φ4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为甲醇和水在0～20 min内由10∶90至30∶70、20～45 min内由30∶70至80∶20梯度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长254 nm，230 nm，柱温28 ℃。在该色谱条件下10种成分均达到基线分离。
2.2 对照品储备液的配制 精确称取对照品S1 2.1 mg、S2 2.6 mg、S3 1.5 mg、S4 7.1 mg、S5 9.4 mg、S6 1.1 mg、S7 6.5 mg、S8 5.9 mg、S9 4.3 mg、S10 5.3 mg分别置10 mL容量瓶中，以甲醇溶解并定容，配制成相应浓度的对照品储备液。
2.3 样品溶液的制备 精确称取粉碎至80目的待测样品3份，每份1.000 g，分别加入40.00 mL甲醇置80 ℃水浴中索式提取75 min，提取后采取体积补偿，过0.45 μm滤膜，在“2.1”色谱条件下测定峰面积。
2.4 线性关系的考察 取S1～S10 10种标样进样体积分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2、4、6、8、10 μL，以峰面积的积分值定量。S1～S10的回归方程及相关系数见表1。
2.5 精密度试验 取含S1 0.36 mg/mL、S2 1.07 mg/mL、S3 1.14 mg/mL、S4 0.69 mg/mL、S5 0.53 mg/mL、S6 0.94 mg/mL、S7 0.05 mg/mL、S8 0.93 mg/mL、S9 0.16 mg/mL、S10 0.15 mg/mL混合对照品溶液，在“2.1”色谱条件下测定色谱峰的峰面积，计算得RSD分别为0.82%、0.90%、0.73%、0.79%、1.1%、0.39%、0.95%、0.66%、0.82%、0.96%(n=6)，表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验 精确称取大籽獐牙菜样品1.000 g，按“2.3”项下方法操作，分别在0、2、4、6、8、16、24 h时进样，测定S1～S10的峰面积 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1830KB，3页)。