HPLC-ELSD法测定玉屏风颗粒中甘露醇的含量
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摘要：目的：建立用液相色谱法联用蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定玉屏风颗粒中辅料甘露醇的含量。方法：采用Prevail Carbohydrate ES 柱(Φ4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈—水(75∶25)，流速1.0 mL•min-1，蒸发光检测器。结果：线性范围1.509 76～11.323 2 μg，r＝0.999 9；平均回收率为99.3%，RSD＝1.44%(n＝6)。结论：该法快速、准确、可靠；可作为玉屏风颗粒辅料甘露醇的检查。
关键词：液相色谱法联用蒸发光散射检测器；玉屏风颗粒；辅料；甘露醇；含量
中图分类号：R284文献标识码：A
文章编号：1007-2349(2011)12-0059-02
玉屏风颗粒收载于《中国药典》2010年版一部[1]，由黄芪、防风及炒白术3味药组成，具有益气，固表，止汗之功效。主要用于表虚不固，自汗恶风，面色晄白，或体虚易感风邪者。玉屏风颗粒为国家中药保护品种，全国独家生产，生产厂家为广东环球制药股份有限公司。甘露醇是玉屏风颗粒中的稀释剂，较传统稀释剂有易溶解等优点，但具有对人体肠道的清理和轻微的脱水作用。为考察其辅料的投料情况，此次试验建立了HPLC-ELSD法测定玉屏风颗粒中辅料甘露醇的含量，为辅料的添加及控制提供了科学依据。
1仪器和试药
Agilent1200高效液相色谱仪，带四元泵；瓦里安300蒸发光散射检测器；自动进样器；在线真空脱气机；智能化柱温箱及HP化学工作站；乙腈为HPLC级，水为超纯水。甘露醇对照品(中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号：111522-200607)。26批玉屏风颗粒样品均由广东环球制药股份有限公司提供。
2色谱条件
色谱柱：Prevail Carbohydrate ES 柱(Φ4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈—水(75∶25)；流速：1.0 mL•min-1；柱温：30 ℃；蒸发光检测器，雾化器温度：90 ℃；漂移管温度：60 ℃；气体流速：2.0 L•min-1。
3溶液的配制
3.1对照品溶液的配制精密称取甘露醇对照品适量，加甲醇制成每1 mL含甘露醇 0.75 mg 的溶液，即得。
3.2供试品溶液的配制取本品内容物，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50 mL，称定重量，微热使溶解，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2 mL，于10 mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液过0.45um微孔滤膜，取续滤液，即得。
3.3阴性样品溶液的配制取不含辅料的样品制剂，按上述供试品溶液制备方法制备，即得阴性样品溶液。
4方法与结果
4.1系统适用性分别精密吸取对照品溶液5、10 μL，供试品溶液10 μL，阴性样品溶液10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以外标两点法对数方程计算，即得。在此色谱条件下，甘露醇色谱峰理论塔板数应不低于10000，且阴性样品溶液无干扰。结果见图1。图1玉屏风颗粒液相色谱图
A.对照品;B.样品;C.阴性样品
4.2线性关系精密称取甘露醇对照品适量，置量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，再以水稀释至一系列浓度的对照品溶液，按上述色谱条件分别进样10 μL，记录色谱图，以峰面积的对数(Y)对进样浓度的对数(X)作回归统计，得回归方程为Y=1.382 0 X+6.041 3，r=0.999 9(n=6)，线性范围为1.509 76 μg～11.3232 μg。
4.3精密度试验取“3.1”项下的对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，测得RSD为0.05%。表明仪器精密度良好。
4.4稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、4、9、14、19、24 h进样测定并计算峰面积的对数值。测得RSD为0.24%。表明供试品溶液在制备后24 h内基本稳定。
4.5重复性试验取同一样品，平行制备5份供试品溶液，按上述色谱条件测定并计算。测得RSD为0.42%。表明方法的重现性良好。
4.6加样回收率试验精密称取已知含量的同一样品0.5 g，共6份，加入一定量的甘露醇对照品溶液，挥干溶液，按“2.2”项下供试品溶液制备成加样回收率供试液，并依法测定，结果见表1。
1.44137.01158.72293.3398.49137.53158.72293.4698.24138.41158.72295.2398.804.7含量测定取不同批次的玉屏风颗粒样品，按供试品溶液的配制项下制备供试品溶液，每个批次的样品平行制备2份，测定玉屏风颗粒中辅料甘露醇的含量，结果见表2。
5讨论
5.1色谱柱的选择甘露醇为极性化合物，在常规的C18柱上几乎无保留，无法测定。氨基柱为中等极性柱，其键合相的氨基能与甘露醇选择性作用，达到分离检测的结果。故选择氨基柱为固定相，乙腈—水(75∶25)为流动相时，甘露醇得到较好的分离及较高的理论塔板数。
5.2提取方法的选择根据甘露醇极易溶于水，略溶于乙醇，不溶于乙醚等物理特性，采用水提醇沉法去除杂质，通过对乙腈浓度，溶剂用量和时间的考察，最终确定正文所述的最佳提取工艺。
5.3检测器的选择甘露醇本身没有紫外吸收，故不能选择紫外检测器 ......
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