RP-HPLC-ELSD法测定野生白花丹药材1~12月份根、茎、叶中β-谷甾醇的含量
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摘要：目的：测定野生白花丹药材1~12月份根、茎、叶中β-谷甾醇的含量。方法：采用HPLC-ELSD法测定白花丹中β-谷甾醇的含量。色谱条件为：流动相为纯甲醇；色谱柱为迪马C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流速为1.0 mL/min；柱温25 ℃；蒸发光散射检测器检测参数为漂移管温度65 ℃，载气(N2)流速为2.5 L/min。结果：白花丹叶中β-谷甾醇的含量最高，其次是茎，根中含量最少；3、5、7、8月份采收的药材中含量最高，11、12月最低。结论：以β-谷甾醇为主要成分指标时最佳入药部位为叶，最佳采收期在3、5、7、8月份。
关键词：野生白花丹；β-谷甾醇；含量测定；RP-HPLC-ELSD
中图分类号：R284文献标识码：B
文章编号：1007-2349(2012)02-0055-02
白花丹是双子叶植物蓝雪科植物白雪花(Plumbago zeylanica L.)的全草[1]。为多民族医常用药材，民间应用广泛，具有散瘀消肿、祛风止痛等功效[1]。收载于1996年版《广西中药材标准》第二册和1998年版国家卫生部部颁维药标准。文献资料及本课题组前期的研究表明，白花丹具有抗肿瘤、抗炎、抗肝损伤等药理作用[2~8]。目前国内外日益重视白花丹药材的应用和开发，除有效成分白花丹醌外，对其有效成分β-谷甾醇的研究报道较少。本实验拟对野生白花丹药材1~12月份的根、茎、叶中的β-谷甾醇含量进行测定，以期为白花丹野生变家种提供有用的实验数据。
1实验材料
1.1仪器Waters 2695系列高效液相色谱仪(Waters公司)，Empower色谱工作站，浙江大学N2000色谱工作站，Sedex-75型蒸发光散射检测器(奥泰公司)；色谱柱为迪马C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。RE-52A型旋转蒸发器。METTLER AE 240双量程分析天平。
1.2试药β-谷甾醇对照品(成都市药检所，供含量测定用)；甲醇为色谱纯；所用提取试剂均为分析纯。
1.3药材实验所用药材样品采自于白花丹最适产地云南西双版纳(中国医学科学院药用植物研究所南药园)，经西南民族大学刘圆教授鉴定。
2实验方法与结果
2.1色谱条件色谱柱为迪马C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为纯甲醇；流速为1.0 mL/min；柱温25 ℃；蒸发光散射检测器检测参数为漂移管温度65 ℃，N2流速为2.5 L•min-1。色谱图见图1~图2。
图1β-谷甾醇对照品HPLC色谱图(A)
图2样品HPLC色谱图(B)
2.2对照品溶液的制备精密称取β-谷甾醇对照品10.3 mg，用甲醇溶解于50 mL容量瓶中，制成0.103 mg/mL的溶液作为对照品。
2.3样品溶液的制备精密称取白花丹药材样品约3 g，置于索氏提取器中，精密加入150 mL的甲醇溶液，索氏提取3 h，取出放冷，挥去溶剂，用甲醇溶解于25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4方法学考察
2.4.1标准曲线的制备分别精密吸取β-谷甾醇对照品溶液，依选定色谱条件，测定不同进样量下β-谷甾醇的峰面积值，得回归方程为：Y=1.500 5 X+5.683 6，r=0.998(n=6)。表明β-谷甾醇在0.103～2.575 μg范围内与峰面积值线性关系良好。
2.4.2精密度试验分别精密吸取β-谷甾醇10 μL，各重复进样6次，得RSD为0.015%，结果表明精密度良好。
2.4.3稳定性试验取同一样品根溶液20 μL，按选定色谱条件下于0、2、4、6、8 h测定样品溶液中β-谷甾醇峰面积值，得RSD为0.029%，表明样品稳定性良好。
2.4.4重复性试验分别精密取同一白花丹根药材6份，各约3 g，按样品溶液制备项下方法制备样品，按照选定的色谱条件测定6份样品溶液中β-谷甾醇的含量，得RSD为1.284%。
2.4.5加样回收率试验精确称取已知含量的白花丹药材9份，各约3.0 g，分别加入浓度为0.131 mg/mL β-谷甾醇对照品溶液，按样品溶液制备方法制备并测定，结果见表1。
表1β-谷甾醇加样回收率试验结果(n=9)
序号样品含量
(mg)加入量
(mg)测得量
(mg)回收率
(%)平均回收
率(%)RSD
(%)11.89980.73302.635598.8621.89990.73302.635999.9731.89960.73302.635899.0241.89761.45203.3548100.2551.90071.45203.355598.99100.060.634061.89241.45203.336399.6171.90262.15504.0775100.5981.90092.15504.032299.2491.89452.15504.0694100.522.5样品含量测定取白花丹野生1~12月份药材根、茎、叶按2.3项下样品溶液的制备方法制备，进样量为10 μL，测定β-谷甾醇的含量，结果见表2。
表21~12月份根、茎、叶中β-谷甾醇的含量(n=3)
月份部位β-谷甾醇的含量
(%)月份部位β-谷甾醇的含量
(%)根0.06327根0.05811茎0.0631茎0.0605叶0.1092叶0.1297根0.04188根0.06082茎0.0595茎0.0596叶0.1244叶0.1207根0.04589根0.01123茎0.0874茎0.0738叶0.1367叶0.0898根0.064610根04茎0.0618茎0.0526叶0.0997叶0.1086根0.062811根0.06815茎0.0673茎0叶0.1251叶0.0621根0.048712根0.03786茎0.0621茎0.0435叶0.0842叶0.04243小结与讨论
野生白花丹1~12月份药材根中β-谷甾醇含量变化范围为0 %～0 ......
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