三步止泻手法对兔脾虚证动物模型的血清免疫的实验研究
摘要：目的观察脾虚证小兔模型的症状、血清免疫功能治疗前后变化情况，探求三步止泻治疗小儿腹泻的客观依据，为临床应用推广该疗法提供科学依据。方法采用喂服生大黄粉的造模方法制作脾虚证小兔动物模型30只，随机分为3组(即实验组10、对照组10、模型组10只)实验小兔。实验组采用三步止泻手法治疗，对照组给予思密达药物灌服治疗，模型组给饲料喂养，治疗组予推拿治疗.通过对症状改变，血清免疫功能方面比较，进一步探索三步止泻手法治疗脾虚证动物模型的作用机理。结果 实验兔腹泻后推拿治疗对血液中CPR、IgA、IgM浓度影响较思密达组更为明显，对IgG影响无明显不同。结论推拿手法比思密达治疗对实验兔血清免疫功能影响更明显。
关键词：动物模型；血清C反应蛋白；三步止泻法
中图分类号：R244.1
文献标志码：A
文章编号：1007 - 2349( 2015) 04 - 0068 - 02小儿腹泻亦称小儿泄泻，属于小儿消化不良，是小儿常见的消化系统疾病，脾虚证以腹泻为主要症状，发病年龄3岁以下多见，发病时间一年四季均可发病，尤以季节更替时明显.它是由于小儿脾常不足，脾胃功能容易因外邪或内因导致失调，故出现以大便次数增多并且粪质改变为主要临床表现.病情较重者可出现脱水及电解质紊乱或危及生命，临床中非常重视。小儿推拿疗法是以中医理论为指导，根据小儿的生理病理特点，存其体表特定的穴位或部位以推拿手法为主治疗疾病，强身健体或助长益智的一种外治疗法。该课题组三步止泻法相对简单易掌握，临床观察疗效显著。国内外目前关于手法研究在于使用单一手法治疗脾虚证动物模型对免疫方面的研究，李铁浪[1]研究捏脊疗法可通过降低血清MOT的含量，改善脾虚证家兔的胃肠运动，达到治疗作用；郭争鸣[2]指出推拿明显影响机体的免疫功能。关于脾虚证动物模型制作方面，李志强[3]采用大黄复制脾虚大鼠作研究；薛丽莉[4]一采用大黄复制脾虚泄泻大鼠；有关动物穴位定位方面研究，多为成人十二经络穴位，尚无小儿推拿特定穴位方面的研究，我课题组定穴方法参考郑利岩等[5]《实验家兔常用经穴的客观检测与标定》。故本课题脾的取穴定位于小兔拇指掌面，腹取穴定位即为小兔腹部，上七节骨为小兔骶尾骨正中线。本课题组开展动物实验研究，先完成脾虚证动物模型的造模，后设立实验组和对照组，观察三步止泻治疗、西药思密达治疗前后脾虚证动物模型症状的改善、血清中免疫功能的改变。1 研究内容与方法1.1研究方案 采用喂服生大黄粉的造模方法(参考李志强[3]采用大黄复制脾虚大鼠作研究的方法，方法有改动)制作脾虚证小兔动物模型30只，随机分为3组(即实验组10、对照组10、病模型组10只)实验小兔。实验组采用三步止泻手法治疗，对照组给予思密达药物灌服治疗，空模型组给饲料喂养。在造模后和治疗后观察症状，抽取血清测定免疫功能C反应蛋白，IgA，IgM，lgE。1.2研究步骤1.2.1动物造模材料：(1)动物：昆明家兔40只(云南省中医学院动物中心提供)，断乳仔兔，雌雄不限。实验前在水、饲料供应充足的条件下单笼饲养1周，观察记录正常大便及饮食情况。(2)药物：大黄由云南省中医院药剂科提供，研磨成粉备用。采用ELISA免疫测定方法，(云南省中医院中心实验室联系提供)。1.2.2方法：(1)预实验：预备4只按照小兔制作动物模型，通过喂服生大黄粉(与饲料拌食)连续灌服14天，出现7天以上，腹泻症状，大便形状改变，体重下降等脾虚症状；预实验成功后行下而实验。(2)动物分组：将30只家兔随机分为治疗组、对照组、病模型组，每组10只。(3)模型制备：采用通过喂服生大黄粉(与饲料拌食)方式，连续灌服14 d，每天3次，出现7天以上，腹泻症状，大便形状改变，体重下降等脾虚症状，予取兔耳静脉血，静脉血测定血清测定免疫功能IgA，IgM，lgE，C反应蛋白。(4)治疗组采用三步止泻手法治疗，脾，腹，及上七节骨穴位，手法与临床总结一致。对照组采用思密达药物灌服丁脾虚证小兔，病模型组饲料喂养。(5)治疗后血清标本提取及处理：采集兔耳静脉血各1次。剪家兔耳缘静脉采JIIL2 ml，装入试管中，放入37.2。C电热恒温水槽水浴1h，在3000r/rain，4。C低温离心机中离心lOmin后，取上清装入EP管中，置-70℃冰箱保存待测。(6)血清免疫功能的测定：云南省中医医院中心实验室检测，按MOT放免采用ELISA免疫测定方法，严格按试剂盒要求进行测定。(7)统计学方法使用SPSS17.0 for Windows软件包进行处理。2血清检测结果分析注：与思密达组相比，推拿组血液中CPR浓度水平更低，差异有显著意义(P<0.05)，推拿组血液中IgA浓度水平更高，差异有显著意义(P<0.05)，推拿组血液中IgG浓度水平，差异无显著意义(P>0.05)，推拿组血液中IgM浓度水平更高，差异有显著意义(P<0.05)。3结果与分析实验兔腹泻后血液中CPR、IgA、IgG及IgM浓度均有变化，推拿治疗对血液中CPR、IgA、IgM浓度影响较思密达组更为明显，对IgG影响无明显不同。可见推拿及药物对小兔脾虚证腹泻均有治疗效果，但推拿更明显。4讨论三步止泻法为笔者在12年临床中从事小儿腹泻推拿治疗的临床体会，三法是补脾，摩腹，推上七节骨，此为小儿腹泻治疗中最重要的三步。古籍关于小儿腹泻的治疗有许多，《幼科铣镜》“大指脾面旋推，味似人参，白术。泻之，则为灶土”。《小儿按摩经》“脾土，曲指左旋为补，直推之为泻”。《厘正按摩要术》“大指脾胃，宜多补”。《幼科推拿秘书》：“七节骨，水泻，从龟尾向上擦如数，立刻即止”。《厘正按摩要术》”摩腹，用掌心团摩满腹上，治伤乳食”。《千金翼方》“食毕摩腹能除百病”。临床总结观察补脾，摩腹，推上七节骨是治疗小儿腹泻的关键而义特效的穴位。另外小儿推拿手法要求轻柔轻快，速度也是操作要领之一。该方法应用简便易于操作，可以广泛推广于推拿医生及患儿家属，治疗疗程短，花费少，从长远社会发展，此种独特的绿色疗法可在小儿身体保健治疗方面有很重要的作用。本课题组在临床实践中广泛应用三步止泻法治疗腹泻患儿，取得了很好疗效，并且形成了规范化治疗。该手法最主要的特点就是绿色疗法，操作简单、容易掌握、安全性高、临床疗效显著。临床中发现，该手法能明显改善腹泻患儿的临床症状，止泻快，恢复大便性状，恢复患儿脾胃肠的正常功能。该课题证明该方法对于小兔脾虚证腹泻有明显优于药物组的疗效。该方法应用简便易于操作，可以广泛推广于推拿医生及患儿家属，治疗疗程短，花费少，从长远社会发展，此种独特的绿色疗法可在小儿身体保健治疗方而有很重要的作用。参考文献：[1]李铁浪.捏脊疗法对脾虚证家兔血清胃动索的影响[J].医学研究杂志，2012，39(2)：2.[2]郭争鸣.推拿按摩对免疫调节功能的研究概况[J].湖南中医杂志，2010，26(4)：7[3]李志强.四君子汤对脾虚证大鼠血清性激素和甲状腺激素水平的影响[J].河南中医，2008，3.[4]薛丽莉，益脾止泻对脾虚泄泻大鼠的作用机制研究[J].中国中医急症，2009，8.[5]郑利岩等.实验家兔常用经穴的客观检测与标定[J]. 上海针灸杂志，2003，1.(收稿日期：2014-12-15), http://www.100md.com(杨丽秋)
关键词：动物模型；血清C反应蛋白；三步止泻法
中图分类号：R244.1
文献标志码：A
文章编号：1007 - 2349( 2015) 04 - 0068 - 02小儿腹泻亦称小儿泄泻，属于小儿消化不良，是小儿常见的消化系统疾病，脾虚证以腹泻为主要症状，发病年龄3岁以下多见，发病时间一年四季均可发病，尤以季节更替时明显.它是由于小儿脾常不足，脾胃功能容易因外邪或内因导致失调，故出现以大便次数增多并且粪质改变为主要临床表现.病情较重者可出现脱水及电解质紊乱或危及生命，临床中非常重视。小儿推拿疗法是以中医理论为指导，根据小儿的生理病理特点，存其体表特定的穴位或部位以推拿手法为主治疗疾病，强身健体或助长益智的一种外治疗法。该课题组三步止泻法相对简单易掌握，临床观察疗效显著。国内外目前关于手法研究在于使用单一手法治疗脾虚证动物模型对免疫方面的研究，李铁浪[1]研究捏脊疗法可通过降低血清MOT的含量，改善脾虚证家兔的胃肠运动，达到治疗作用；郭争鸣[2]指出推拿明显影响机体的免疫功能。关于脾虚证动物模型制作方面，李志强[3]采用大黄复制脾虚大鼠作研究；薛丽莉[4]一采用大黄复制脾虚泄泻大鼠；有关动物穴位定位方面研究，多为成人十二经络穴位，尚无小儿推拿特定穴位方面的研究，我课题组定穴方法参考郑利岩等[5]《实验家兔常用经穴的客观检测与标定》。故本课题脾的取穴定位于小兔拇指掌面，腹取穴定位即为小兔腹部，上七节骨为小兔骶尾骨正中线。本课题组开展动物实验研究，先完成脾虚证动物模型的造模，后设立实验组和对照组，观察三步止泻治疗、西药思密达治疗前后脾虚证动物模型症状的改善、血清中免疫功能的改变。1 研究内容与方法1.1研究方案 采用喂服生大黄粉的造模方法(参考李志强[3]采用大黄复制脾虚大鼠作研究的方法，方法有改动)制作脾虚证小兔动物模型30只，随机分为3组(即实验组10、对照组10、病模型组10只)实验小兔。实验组采用三步止泻手法治疗，对照组给予思密达药物灌服治疗，空模型组给饲料喂养。在造模后和治疗后观察症状，抽取血清测定免疫功能C反应蛋白，IgA，IgM，lgE。1.2研究步骤1.2.1动物造模材料：(1)动物：昆明家兔40只(云南省中医学院动物中心提供)，断乳仔兔，雌雄不限。实验前在水、饲料供应充足的条件下单笼饲养1周，观察记录正常大便及饮食情况。(2)药物：大黄由云南省中医院药剂科提供，研磨成粉备用。采用ELISA免疫测定方法，(云南省中医院中心实验室联系提供)。1.2.2方法：(1)预实验：预备4只按照小兔制作动物模型，通过喂服生大黄粉(与饲料拌食)连续灌服14天，出现7天以上，腹泻症状，大便形状改变，体重下降等脾虚症状；预实验成功后行下而实验。(2)动物分组：将30只家兔随机分为治疗组、对照组、病模型组，每组10只。(3)模型制备：采用通过喂服生大黄粉(与饲料拌食)方式，连续灌服14 d，每天3次，出现7天以上，腹泻症状，大便形状改变，体重下降等脾虚症状，予取兔耳静脉血，静脉血测定血清测定免疫功能IgA，IgM，lgE，C反应蛋白。(4)治疗组采用三步止泻手法治疗，脾，腹，及上七节骨穴位，手法与临床总结一致。对照组采用思密达药物灌服丁脾虚证小兔，病模型组饲料喂养。(5)治疗后血清标本提取及处理：采集兔耳静脉血各1次。剪家兔耳缘静脉采JIIL2 ml，装入试管中，放入37.2。C电热恒温水槽水浴1h，在3000r/rain，4。C低温离心机中离心lOmin后，取上清装入EP管中，置-70℃冰箱保存待测。(6)血清免疫功能的测定：云南省中医医院中心实验室检测，按MOT放免采用ELISA免疫测定方法，严格按试剂盒要求进行测定。(7)统计学方法使用SPSS17.0 for Windows软件包进行处理。2血清检测结果分析注：与思密达组相比，推拿组血液中CPR浓度水平更低，差异有显著意义(P<0.05)，推拿组血液中IgA浓度水平更高，差异有显著意义(P<0.05)，推拿组血液中IgG浓度水平，差异无显著意义(P>0.05)，推拿组血液中IgM浓度水平更高，差异有显著意义(P<0.05)。3结果与分析实验兔腹泻后血液中CPR、IgA、IgG及IgM浓度均有变化，推拿治疗对血液中CPR、IgA、IgM浓度影响较思密达组更为明显，对IgG影响无明显不同。可见推拿及药物对小兔脾虚证腹泻均有治疗效果，但推拿更明显。4讨论三步止泻法为笔者在12年临床中从事小儿腹泻推拿治疗的临床体会，三法是补脾，摩腹，推上七节骨，此为小儿腹泻治疗中最重要的三步。古籍关于小儿腹泻的治疗有许多，《幼科铣镜》“大指脾面旋推，味似人参，白术。泻之，则为灶土”。《小儿按摩经》“脾土，曲指左旋为补，直推之为泻”。《厘正按摩要术》“大指脾胃，宜多补”。《幼科推拿秘书》：“七节骨，水泻，从龟尾向上擦如数，立刻即止”。《厘正按摩要术》”摩腹，用掌心团摩满腹上，治伤乳食”。《千金翼方》“食毕摩腹能除百病”。临床总结观察补脾，摩腹，推上七节骨是治疗小儿腹泻的关键而义特效的穴位。另外小儿推拿手法要求轻柔轻快，速度也是操作要领之一。该方法应用简便易于操作，可以广泛推广于推拿医生及患儿家属，治疗疗程短，花费少，从长远社会发展，此种独特的绿色疗法可在小儿身体保健治疗方面有很重要的作用。本课题组在临床实践中广泛应用三步止泻法治疗腹泻患儿，取得了很好疗效，并且形成了规范化治疗。该手法最主要的特点就是绿色疗法，操作简单、容易掌握、安全性高、临床疗效显著。临床中发现，该手法能明显改善腹泻患儿的临床症状，止泻快，恢复大便性状，恢复患儿脾胃肠的正常功能。该课题证明该方法对于小兔脾虚证腹泻有明显优于药物组的疗效。该方法应用简便易于操作，可以广泛推广于推拿医生及患儿家属，治疗疗程短，花费少，从长远社会发展，此种独特的绿色疗法可在小儿身体保健治疗方而有很重要的作用。参考文献：[1]李铁浪.捏脊疗法对脾虚证家兔血清胃动索的影响[J].医学研究杂志，2012，39(2)：2.[2]郭争鸣.推拿按摩对免疫调节功能的研究概况[J].湖南中医杂志，2010，26(4)：7[3]李志强.四君子汤对脾虚证大鼠血清性激素和甲状腺激素水平的影响[J].河南中医，2008，3.[4]薛丽莉，益脾止泻对脾虚泄泻大鼠的作用机制研究[J].中国中医急症，2009，8.[5]郑利岩等.实验家兔常用经穴的客观检测与标定[J]. 上海针灸杂志，2003，1.(收稿日期：2014-12-15), http://www.100md.com(杨丽秋)