唐中生,吴春朋,谢高宇,陆 莹,罗亚非

    (贵阳中医学院，贵州 贵阳 550025)

    甘草多糖对脐血源单核细胞分化为树突状细胞过程中NF-kBp65表达的影响*

    唐中生,吴春朋,谢高宇,陆 莹,罗亚非

    (贵阳中医学院，贵州 贵阳 550025)

    目的 观察脐血源单核细胞分化为树突状细胞(DC)的过程中，核转录因子-kB p65(NF-kB p65)的表达以及GPS对单核细胞分化为DC的影响。方法 无菌条件下采集脐血，非连续密度梯度离心获取脐血单核细胞；用含粒单细胞刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)、脂多糖(LPS)和GPS的RPMI-1640培养液分别对细胞因子组、GPS组、联合培养组的单核细胞进行体外培养；应用倒置相差显微镜、瑞氏染色和CD86、CD83、HLA-DR、S-100的免疫细胞化学法鉴定单核细胞和DC。动态观察单核细胞分化为DC过程中不同时间点的NF-kB p65的表达，并进行图像和SPSS软件分析。结果 CD86、CD83、HLA-DR、S-100的免疫细胞化学法证实所获单核细胞和DC符合各自的形态和表型特征。在含GM-CSF和IL-4的RPMI-1640培养液培养7d时，单核细胞分化成未成熟DC(imDC)；在含GM-CSF、IL-4和LPS的RPMI-1640培养液继续培养5d时，imDC分化为成熟DC(mDC)，两者的细胞核内NF-kB p65表达具有显著性差异(P材料和方法

    1.1 材料和试剂

    1.1.1 脐血 新鲜无菌脐血(肝素抗凝)80mL，由学院一附院产科提供。

    1.1.2 药物 甘草多糖(纯度>90%)购自美国泛华医药公司北京代表处。真空干燥的甘草多糖用含双抗、不含血清的RPMI-1640培养液于每次实验前配制成所需浓度的工作液，经0.45μm滤膜过滤除菌。

    1.1.3 试剂 RPMI-1640培养液(GIBCO公司)，淋巴细胞分离液(Ficoll，D=1.077)，上海试剂二厂;胎牛血清(FCS)，(HyClone公司);粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、脂多糖(LPS)，均为英国Protechec公司产品;即用型二步法非生物素检测试剂盒(PV9000)、DAB显色试剂盒、磷酸盐缓冲液(PBS，0.01mol/LpH7.2～7.4)均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

    1.1.4 仪器 超净工作台，苏州安泰空气技术公司；CO2培养箱，美国Forma公司；电控恒温水浴箱 ......