青刺果油皮炎凝胶的急毒试验和皮肤刺激试验研究
摘要：目的观察青刺果油皮炎凝胶的急性毒性试验和皮肤刺激试验。方法本试验采用5 g/kg.bw最大给药量进行家兔经皮急性毒性试验；采用同体自身对照法进行家兔皮肤刺激试验。结果最大给药量给药后动物未出现中毒反应及死亡，皮肤刺激试验未见红斑及水肿，药物组与基质组、空白组相比，病变程度、病变范围及病变发生率无明显差异。结论急性毒性试验，未发现明显毒性反应和死亡；皮肤刺激试验，对家兔完整皮肤和破损皮肤均无刺激性，表明青刺果油皮炎凝胶外用安全。
关键词：青刺果油皮炎凝胶；急性毒性；皮肤刺激
中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349(2016)05-0052-02
青刺果为蔷薇科植物青刺尖(Prinsepia utilis Royle)的果实，中文学名总花扁核木，属蔷薇科、李亚科扁核木属植物，别名青刺尖、打油果、青那果、狗奶子、炮筒果、梅花刺、打枪果、枪子果、阿那斯(纳西族)，出裸(彝族)[1]。它生长于海拔 1800～3000 m 的山坡、荒地、地边、路边和背阴灌丛中，在寒冷的冬季仍具极强生命力，在我国云南、四川和贵州等省均有分布，云南以丽江及其周边地区为主要产地。青刺果在云南民间具有悠久的药用历史，根、叶、果均可入药或食用，具有清热、解毒、健胃等作用。
青刺果油皮炎凝胶是云南省中医中药研究院根据云南省丽江纳西族民间药用方法研制，采用纯天然原料，具有治疗湿疹的作用[2]。本实验旨在研究皮肤给药的安全性，为临床应用提供理论依据。
1实验材料
1.1实验动物普通级家兔，体重2.0～3.5 kg，来源于昆明医学院实验动物中心，实验动物生产许可证号：SCXK(滇)2011-0004。
1.2受试物及对照品青刺果油皮炎凝胶，批号：20150901；空白凝胶基质，均由云南省中医中药研究院配制。阴性对照，氯化钠注射液，250 mL/瓶，250 mL/2.25 g，批号1114231，生产单位：昆明南疆制药有限公司。
2实验方法
2.1急性毒性试验[3]
2.1.1分组普通级家兔用随机法分为3组，即空白对照组，基质对照组和受试物原生药组，每组10只，雌雄各5只。分笼饲养，每笼1只。
2.1.2给药途径及剂量采用5 g/kg最大给药量进行经皮急性毒性试验。[JP2]
2.1.3给药方法及观察时间动物给药前24h背部去毛，涂药面积应占体表面积10%，家兔为10 cm×16 cm。先将动物固定，将受试物均匀涂敷于动物背部皮肤染毒区，然后用一层薄胶片覆盖，无刺激胶布固定，防止动物舔食。基质对照组按上述方法涂敷基质，采用24 h两次给药的方法，给药容量为2.5 mL/kg，给药量为5.0 g/kg。一般封闭接触 24 h。24 h后用温水洗去皮肤上的受试物，再进行局部观察，连续观察14 d。[JP]
2.1.4观察指标观察动物体重、皮肤黏膜、毛发光泽、呼吸、四肢活动等及其他中毒表现和死亡数。
2.1.5统计学方法采用SPSSwin11.5软件对动物体重进行成组t检验和配对t检验统计分析。
2.2皮肤刺激试验[4]
2.2.1试验分组适应性饲养后，选择健康皮肤完好的合格动物12只用于试验，单笼饲养。实验前动物处理：适应性饲养一周，试验前24 h对日本大耳兔背部剪毛，分隔为3个区域各3 cm×3 cm；完整皮肤组无需任何处理，破损皮肤组用灭菌针头以“井”字划破表皮，以渗血为度。
2.2.2给药途径及剂量取受试物、基质对照、生理盐水分别在去毛区域左上、右上，左下3块皮肤每天涂抹1次，连续涂抹 7 d。
2.2.3给药方法及观察时间分别取相应的凝胶或生理盐水0.5 mL涂于相应的皮肤，每天涂抹1次，连续涂抹7 d，左下区域皮肤为基质对照，右上区域皮肤作为阴性对照，给予相应的受试物后用一层保鲜膜覆盖和二层纱布，再用无刺激性胶布加以固定。每次涂抹前应剪毛，用水或无刺激性溶剂清除残留受试物，1 h后观察结果，按表1评分，对照区和试验区同样处理。
2.2.4观察指标一般观察：每天观察动物精神、活动、饮食等一般状况，同时每周称一次体重。每天肉眼观察及记录涂敷部位红斑、水肿、色素沉着、出血点、皮肤情况出现和消退时间，并参照表1对红斑和水肿情况进行评分。
2.2.5结果评价按下列公式计算每天每只动物平均积分，以表 1 判定皮肤刺激性强度。
每天每只动物平均积分=[SX(]∑红斑和水肿积分[]受试动物数[SX)][JB<2/]14
3实验结果
3.1急性毒性试验
3.1.1一般情况及体征给药后动物未出现中毒反应和死亡，24 h后用温水洗去皮肤上的试验受试物，未观察到皮肤红斑、丘疹、水肿等反应。连续饲养观察14 d，2组动物一般状况好，解剖动物，主要脏器、器官未见明显异常改变。
3.1.2体重变化给药前、给药后7 d、14 d体重组间比较无显著性差异(P>0.05)，试验前后组内比较有显著性差异(P<0.01)，提示两组动物体重均有增长。见表3。
3.2皮肤刺激试验
3.2.1变化家兔皮肤连续7天外涂青刺果油皮炎凝胶后，动物行为活动、进食饮水及精神状态等一般情况良好，动物体重均有增长，组间比较和比较均无显著性差异(P>0.05)，给药前后组内比较有显著性差异(P<0.05)。
3.2.2局部肉眼观察结果连续7d皮肤外涂青刺果油皮炎凝胶，于每天给药前、每次除药物后1 h以及末次给药后24、48和72 h肉眼观察，完整皮肤组基质对照区、空白对照区和试验区三块皮肤未见红斑及水肿。破损皮肤组基质对照区、空白对照区和试验区皮两三块皮肤给药第1、2 d可见轻微发红，无水肿，于第3 d基本恢复，考虑是用灭菌针头人为制造破损皮肤引起的损伤。皮肤刺激强度评分<0.5。各试验组皮肤刺激评分见表5。
3.2.3病理组织学检查给药末期和恢复期破损皮肤组，完整皮肤组均可见表皮不同程度的增生，真皮乳头层不同程度的淋巴细胞浸润，给药末期破损皮肤组的皮肤病变重于完整皮肤组，但药物组与基质组、空白组相比，病变程度、病变范围及病变发生率无明显差异。停药恢复14天后，破损皮肤和完整皮肤组均较末次给药72小时后病变减轻，病变范围缩小。
4结论
青刺果油凝胶以最大给药量法进行家兔急性经皮毒性试验，未发现明显毒性反应和死亡，剂量为5.0 g/kg，为临床用药量的333.33倍；青刺果油皮炎凝胶进行家兔多次皮肤刺激试验，在本实验条件下对家兔完整皮肤和破损皮肤均无刺激性，表明青刺果油皮炎凝胶外用安全。
参考文献：
[1]江苏植物研究所.新华本草纲要[M].第3册.上海：上海科学技术出版社，1990.195.
[2]张宇，蒋召雪.野生青刺果研究综述[J].西昌学院学报：自然科学版，2007，21(3)：34-36.
[3]中华人民共和国卫生部药政局.中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)[S].1994：209.
[4]国家食品药品监督管理局.药物研究技术指导原则[S].北京.中国医药科技出版社，2005：227-242，243-254., 百拇医药(曹玺 和丽生 赵远 郭世民)
关键词：青刺果油皮炎凝胶；急性毒性；皮肤刺激
中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-2349(2016)05-0052-02
青刺果为蔷薇科植物青刺尖(Prinsepia utilis Royle)的果实，中文学名总花扁核木，属蔷薇科、李亚科扁核木属植物，别名青刺尖、打油果、青那果、狗奶子、炮筒果、梅花刺、打枪果、枪子果、阿那斯(纳西族)，出裸(彝族)[1]。它生长于海拔 1800～3000 m 的山坡、荒地、地边、路边和背阴灌丛中，在寒冷的冬季仍具极强生命力，在我国云南、四川和贵州等省均有分布，云南以丽江及其周边地区为主要产地。青刺果在云南民间具有悠久的药用历史，根、叶、果均可入药或食用，具有清热、解毒、健胃等作用。
青刺果油皮炎凝胶是云南省中医中药研究院根据云南省丽江纳西族民间药用方法研制，采用纯天然原料，具有治疗湿疹的作用[2]。本实验旨在研究皮肤给药的安全性，为临床应用提供理论依据。
1实验材料
1.1实验动物普通级家兔，体重2.0～3.5 kg，来源于昆明医学院实验动物中心，实验动物生产许可证号：SCXK(滇)2011-0004。
1.2受试物及对照品青刺果油皮炎凝胶，批号：20150901；空白凝胶基质，均由云南省中医中药研究院配制。阴性对照，氯化钠注射液，250 mL/瓶，250 mL/2.25 g，批号1114231，生产单位：昆明南疆制药有限公司。
2实验方法
2.1急性毒性试验[3]
2.1.1分组普通级家兔用随机法分为3组，即空白对照组，基质对照组和受试物原生药组，每组10只，雌雄各5只。分笼饲养，每笼1只。
2.1.2给药途径及剂量采用5 g/kg最大给药量进行经皮急性毒性试验。[JP2]
2.1.3给药方法及观察时间动物给药前24h背部去毛，涂药面积应占体表面积10%，家兔为10 cm×16 cm。先将动物固定，将受试物均匀涂敷于动物背部皮肤染毒区，然后用一层薄胶片覆盖，无刺激胶布固定，防止动物舔食。基质对照组按上述方法涂敷基质，采用24 h两次给药的方法，给药容量为2.5 mL/kg，给药量为5.0 g/kg。一般封闭接触 24 h。24 h后用温水洗去皮肤上的受试物，再进行局部观察，连续观察14 d。[JP]
2.1.4观察指标观察动物体重、皮肤黏膜、毛发光泽、呼吸、四肢活动等及其他中毒表现和死亡数。
2.1.5统计学方法采用SPSSwin11.5软件对动物体重进行成组t检验和配对t检验统计分析。
2.2皮肤刺激试验[4]
2.2.1试验分组适应性饲养后，选择健康皮肤完好的合格动物12只用于试验，单笼饲养。实验前动物处理：适应性饲养一周，试验前24 h对日本大耳兔背部剪毛，分隔为3个区域各3 cm×3 cm；完整皮肤组无需任何处理，破损皮肤组用灭菌针头以“井”字划破表皮，以渗血为度。
2.2.2给药途径及剂量取受试物、基质对照、生理盐水分别在去毛区域左上、右上，左下3块皮肤每天涂抹1次，连续涂抹 7 d。
2.2.3给药方法及观察时间分别取相应的凝胶或生理盐水0.5 mL涂于相应的皮肤，每天涂抹1次，连续涂抹7 d，左下区域皮肤为基质对照，右上区域皮肤作为阴性对照，给予相应的受试物后用一层保鲜膜覆盖和二层纱布，再用无刺激性胶布加以固定。每次涂抹前应剪毛，用水或无刺激性溶剂清除残留受试物，1 h后观察结果，按表1评分，对照区和试验区同样处理。
2.2.4观察指标一般观察：每天观察动物精神、活动、饮食等一般状况，同时每周称一次体重。每天肉眼观察及记录涂敷部位红斑、水肿、色素沉着、出血点、皮肤情况出现和消退时间，并参照表1对红斑和水肿情况进行评分。
2.2.5结果评价按下列公式计算每天每只动物平均积分，以表 1 判定皮肤刺激性强度。
每天每只动物平均积分=[SX(]∑红斑和水肿积分[]受试动物数[SX)][JB<2/]14
3实验结果
3.1急性毒性试验
3.1.1一般情况及体征给药后动物未出现中毒反应和死亡，24 h后用温水洗去皮肤上的试验受试物，未观察到皮肤红斑、丘疹、水肿等反应。连续饲养观察14 d，2组动物一般状况好，解剖动物，主要脏器、器官未见明显异常改变。
3.1.2体重变化给药前、给药后7 d、14 d体重组间比较无显著性差异(P>0.05)，试验前后组内比较有显著性差异(P<0.01)，提示两组动物体重均有增长。见表3。
3.2皮肤刺激试验
3.2.1变化家兔皮肤连续7天外涂青刺果油皮炎凝胶后，动物行为活动、进食饮水及精神状态等一般情况良好，动物体重均有增长，组间比较和比较均无显著性差异(P>0.05)，给药前后组内比较有显著性差异(P<0.05)。
3.2.2局部肉眼观察结果连续7d皮肤外涂青刺果油皮炎凝胶，于每天给药前、每次除药物后1 h以及末次给药后24、48和72 h肉眼观察，完整皮肤组基质对照区、空白对照区和试验区三块皮肤未见红斑及水肿。破损皮肤组基质对照区、空白对照区和试验区皮两三块皮肤给药第1、2 d可见轻微发红，无水肿，于第3 d基本恢复，考虑是用灭菌针头人为制造破损皮肤引起的损伤。皮肤刺激强度评分<0.5。各试验组皮肤刺激评分见表5。
3.2.3病理组织学检查给药末期和恢复期破损皮肤组，完整皮肤组均可见表皮不同程度的增生，真皮乳头层不同程度的淋巴细胞浸润，给药末期破损皮肤组的皮肤病变重于完整皮肤组，但药物组与基质组、空白组相比，病变程度、病变范围及病变发生率无明显差异。停药恢复14天后，破损皮肤和完整皮肤组均较末次给药72小时后病变减轻，病变范围缩小。
4结论
青刺果油凝胶以最大给药量法进行家兔急性经皮毒性试验，未发现明显毒性反应和死亡，剂量为5.0 g/kg，为临床用药量的333.33倍；青刺果油皮炎凝胶进行家兔多次皮肤刺激试验，在本实验条件下对家兔完整皮肤和破损皮肤均无刺激性，表明青刺果油皮炎凝胶外用安全。
参考文献：
[1]江苏植物研究所.新华本草纲要[M].第3册.上海：上海科学技术出版社，1990.195.
[2]张宇，蒋召雪.野生青刺果研究综述[J].西昌学院学报：自然科学版，2007，21(3)：34-36.
[3]中华人民共和国卫生部药政局.中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)[S].1994：209.
[4]国家食品药品监督管理局.药物研究技术指导原则[S].北京.中国医药科技出版社，2005：227-242，243-254., 百拇医药(曹玺 和丽生 赵远 郭世民)