靛玉红对肿瘤血管内皮细胞增殖迁移及血管形成的影响(2)
1.2.3 细胞增殖能力测定 采用MTT 法检测细胞增殖能力,取对数生长期HUVEC、Td-EC细胞,调整细胞浓度为2×104 cells/mL接种于96孔培养板,200 μL/孔。以0、5、10 μmol/L浓度靛玉红处理细胞。置37℃、5% CO2 培养箱培养,分别在24、48、72 h后,加入MTT(5 mg/mL)20 μl/孔继续培养4 h,弃原培养液,加入DMSO 150 μl/孔,室温轻度振荡10 min,酶标仪检测490 nm的OD值,实验重复3次。1.2.4 肿瘤血管内皮细胞迁移能力测定 采用划痕法测定肿瘤血管内皮细胞迁移能力。将HUVEC及Td-EC细胞接种于6孔板,以0、5、10 μmol/L浓度靛玉红处理细胞。待细胞融合后划痕,48 h后,用导倒置显微镜观察、拍照,测量划痕距离。
1.2.5 血管形成实验 在24孔板中加入matrigel胶(按1:2比例与无血清培养基混合),置37℃凝固后,将HUVEC、Td-EC细胞以1.5×105 cells/mL接种于24孔板中 ......
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