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编号:13048032
木贼有效部位抑制氧化低密度脂蛋白致内皮细胞凋亡及Caspase—3的表达(2)
http://www.100md.com 2017年6月1日 《云南中医中药杂志》 2017年第6期
     1.3ox-LDL的制备采用沉淀法参照文献[4]制备。

    1.4细胞培养与分组采用15%新生小牛血清DMEM作为培养液,在37℃、5%CO2培养箱中瓶养人脐静脉内皮细胞。取对数生长期细胞15瓶,将细胞培养液换成无血清DMEM培养液,培养6h后随机分成3组①对照组:无血清DMEM培养液;②模型组:无血清DMEM培养液培养1h后加入ox-LDL,使其终浓度为80μg/ml;③木贼有效部位组(以下简称有效部位组):无血清DMEM培养液中加入木贼有效部位,使其终浓度为50μg/ml,培养1h后加入ox-LDL,使其终浓度为80 μg/ml。继续培养12h后收集细胞和培养液进行检测。

    1.5流式细胞仪检测细胞凋亡率及Caspase-3蛋白用胰酶消化收获细胞并用PBS冲洗2次,1500 r/in离心5min弃上清,细胞用70%冷乙醇固定,置于-20℃保存待测。碘化丙啶染色后,流式细胞仪检测内皮细胞凋亡率。加入Caspase-3多克隆一抗,IgG-PE二抗,进行免疫荧光数据分析。以荧光指数(FI)表示其蛋白表达的相对含量,公式:FI=(样品平均荧光强度-对照样品平均荧光强度)/正常对照样品平均荧光强度。(FI>1.0为阳性,FI≤1.0为阴性)

    1.6RT-PCR 按Trizol试剂盒说明书提取各组细胞总mRNA ......
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