HPLC法测定罗汉膏中罗汉果皂苷V的含量(2)
2.9 稳定性考察 精密吸取同一批号的供试品溶液，在不同时间0、2、4、6、8h，按“2.1”项下的色谱条件进样测定，记录峰面积，RSD为1.57%，结果表明，罗汉膏供试品溶液放置8h内基本稳定。
2.10 加样回收率试验 精密称取已知罗汉果皂苷V 含量的罗汉膏6份，分别加入适量的罗汉果皂苷V对照品溶液，按“2.3”项下方法制备，分别精密吸取10μl按“2.1”项下的色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果见表1。
由表1可知，罗汉果皂苷V的平均加样回收率为100.08%，六份加样回收率均在95%-105%之间，且RSD<3%，说明方法的准确度良好。
2.11 耐用性试验 精密吸取供试品溶液10 μL，分别改变温度±5℃，改变流动相比例±5%，改变色谱柱为Kromasil 100-5C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，按“2.1”项下的色谱条件进样测定，计算罗汉果皂苷V的含量，结果三种条件下测定的含量RSD均小于1，表明该方法耐用性良好。
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2.12 样品含量测定 分别精密称取中试生产的三批样品(批号为20161101，20161102，20161103)5 g按照“2.3”项下方法制备样品溶液，按“2.1”项下的色谱条件精密吸取10μl进样测定，记录峰面积，计算罗汉果皂苷V的含量，结果见表2。
3 讨论
在罗汉果皂苷V含量测定中，供试品溶液制备方法分别考察了过AB-8树脂柱洗脱、乙醇回流、甲醇回流、乙醇超声、甲醇超声等方法，结果表明，乙醇超声制备出的样品存在含量不均的现象，其余几种方法提取结果差异不大。从节省制样时间及试剂毒性大小多方面考虑，最后选择制备样品的方法为乙醇回流提取。
本试验比较了甲醇-水、乙腈-水等比例条件下对样品中罗汉果皂苷V分离度的影响，结果发现，采用乙腈-水(22：78)洗脱时罗汉果皂苷V能得到良好的分离。
在含量测定方法学研究过程中，发现室温对样品分离度影响较大，故在测定样品时注意控制室内温度。
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罗汉膏是泸州市中医医院根据治疗咳嗽的经验，摸索出治疗肺热型咳嗽的经验方制成的煎膏剂，便于携带和服用，为肺热型咳嗽疾病提供一種新的制剂。本研究采用外标法测定君药罗汉果的主成分罗汉果皂苷V，对罗汉膏的质量控制进行含量测定研究，根据研究结果对三批中试生产的罗汉膏成品进行含量测定，结果稳定可靠，为该制剂的质量评价提供了科学的理论依据。
参考文献：
[1]刘婷，王旭华，李春，等.罗汉果皂苷V的镇咳、祛痰及解痉作用研究[J].中国药学杂志，2007，42(20)：1534-1536.
[2]吴旖，江仁望，赵斌.百部新碱与罗汉果皂苷Ⅴ联用对小鼠的镇咳、祛痰作用研究[J].中国药房，2017，28(13)：1755-1757.
[3]张庆莲，黄娟，吴智惠，等.罗汉果的药理及开发应用的研究概况[J].药学研究，2017，32(2)：164-165.
[4]邓梦霞，张桂芬，刘欢.罗汉果止咳糖浆中罗汉果皂苷V的含量测定[J].中成药，2010，32(2)：340-341.
[5]刘元，莫海涛，文志云，等.复方罗汉果止咳片质量标准研究[J].中成药，2010，32(2)：341-343.
[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2015：212.
[7]屠寒，卢金清，江汉美，等.HPLC法测定罗麦颗粒中罗汉果皂苷V、甘草苷和甘草酸的含量[J].中医药导报，2017，23(4)：56-62., http://www.100md.com(张庆莲 皮凤娟 黄娟)
2.10 加样回收率试验 精密称取已知罗汉果皂苷V 含量的罗汉膏6份，分别加入适量的罗汉果皂苷V对照品溶液，按“2.3”项下方法制备，分别精密吸取10μl按“2.1”项下的色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果见表1。
由表1可知，罗汉果皂苷V的平均加样回收率为100.08%，六份加样回收率均在95%-105%之间，且RSD<3%，说明方法的准确度良好。
2.11 耐用性试验 精密吸取供试品溶液10 μL，分别改变温度±5℃，改变流动相比例±5%，改变色谱柱为Kromasil 100-5C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，按“2.1”项下的色谱条件进样测定，计算罗汉果皂苷V的含量，结果三种条件下测定的含量RSD均小于1，表明该方法耐用性良好。
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2.12 样品含量测定 分别精密称取中试生产的三批样品(批号为20161101，20161102，20161103)5 g按照“2.3”项下方法制备样品溶液，按“2.1”项下的色谱条件精密吸取10μl进样测定，记录峰面积，计算罗汉果皂苷V的含量，结果见表2。
3 讨论
在罗汉果皂苷V含量测定中，供试品溶液制备方法分别考察了过AB-8树脂柱洗脱、乙醇回流、甲醇回流、乙醇超声、甲醇超声等方法，结果表明，乙醇超声制备出的样品存在含量不均的现象，其余几种方法提取结果差异不大。从节省制样时间及试剂毒性大小多方面考虑，最后选择制备样品的方法为乙醇回流提取。
本试验比较了甲醇-水、乙腈-水等比例条件下对样品中罗汉果皂苷V分离度的影响，结果发现，采用乙腈-水(22：78)洗脱时罗汉果皂苷V能得到良好的分离。
在含量测定方法学研究过程中，发现室温对样品分离度影响较大，故在测定样品时注意控制室内温度。
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罗汉膏是泸州市中医医院根据治疗咳嗽的经验，摸索出治疗肺热型咳嗽的经验方制成的煎膏剂，便于携带和服用，为肺热型咳嗽疾病提供一種新的制剂。本研究采用外标法测定君药罗汉果的主成分罗汉果皂苷V，对罗汉膏的质量控制进行含量测定研究，根据研究结果对三批中试生产的罗汉膏成品进行含量测定，结果稳定可靠，为该制剂的质量评价提供了科学的理论依据。
参考文献：
[1]刘婷，王旭华，李春，等.罗汉果皂苷V的镇咳、祛痰及解痉作用研究[J].中国药学杂志，2007，42(20)：1534-1536.
[2]吴旖，江仁望，赵斌.百部新碱与罗汉果皂苷Ⅴ联用对小鼠的镇咳、祛痰作用研究[J].中国药房，2017，28(13)：1755-1757.
[3]张庆莲，黄娟，吴智惠，等.罗汉果的药理及开发应用的研究概况[J].药学研究，2017，32(2)：164-165.
[4]邓梦霞，张桂芬，刘欢.罗汉果止咳糖浆中罗汉果皂苷V的含量测定[J].中成药，2010，32(2)：340-341.
[5]刘元，莫海涛，文志云，等.复方罗汉果止咳片质量标准研究[J].中成药，2010，32(2)：341-343.
[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2015：212.
[7]屠寒，卢金清，江汉美，等.HPLC法测定罗麦颗粒中罗汉果皂苷V、甘草苷和甘草酸的含量[J].中医药导报，2017，23(4)：56-62., http://www.100md.com(张庆莲 皮凤娟 黄娟)
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