2.1 年轻及老年小鼠、细胞分离、培养 分别取年轻及老年小鼠背部皮肤，D-Hanks液中浸洗，剪成10mm×5mm小块，使用中性蛋白酶消化1.5h。分离获取表皮，制得表皮细胞悬液。接种于培养皿中。37℃、5%CO2条件下培养传代。其中老年组细胞分为2组，一组常规培养，一组用含2.5%药物的培养基培养;年轻组常规培养。48h后收集细胞用于指标检测。

    2.2 Western Blot检测K18蛋白表达 细胞胰酶消化后，裂解，离心取上清液。BCA法计算出各组样品的蛋白浓度。电泳，转膜，封闭后，一抗孵育过夜。加入二抗，反应结束后，显色。使用G：BOX chemiXR5成像，使用Gel-Pro32软件对结果进行灰度分析。测定分析目的条带与内参GAPDHH灰度值之比来反应蛋白表达水平。

    2.3 Real-time PCR法检测K18基因表达 充分裂解的细胞后，提取总RNA，并测定总RNA的含量和纯度。根据总RNA的含量，合成cDNA第一链，进行PCR扩增。反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性15s，60℃退火20s，72℃延伸40s(依次循环40次)，72℃，5min，每组别做三次定量检测 ......