杨光至,刘梅芳,施 静△,张如意,冯斯峰,徐连杰,赵晓庆,王 敏,王嘉辉

    (1.云南省中医医院,云南 昆明 650021;2.云南中医药大学,云南 昆明 650500)

    脑梗死已成为威胁人类健康的重大疾病[1],脑梗死导致的上运动神经元损害表现多样,偏身骨骼肌肌力减弱是脑梗死患者骨骼肌的变化之一,在骨骼肌收缩过程中,Vmentin及desmin在维持肌肉细胞的骨架及细胞骨架的完整程度方面亦有一定作用。有研究运用无标记质谱联用比较免疫印迹技术,能够在肌肉受损及肌肉的轻度退化中的对比鉴定出vimentin等蛋白的显著改变[2],对研究小鼠肌肉收缩功能恢复与Vmentin的关系提供了佐证。desmin为中等径细胞骨架纤维,对细胞结构的支撑、细胞形状的决定及细胞机械强度的赋予等有重要作用[3]。高张力的机械牵拉会使细胞骨架的正常结构受到影响,进而造成肌肉收缩蛋白的结构破坏[4-6]。故在本研究中选取以上2个基因观察针刺介入治疗后mRNA的表达情况。本实验在建立脑梗死大鼠模型的基础上,运用qRT-PCR检测法,观察针刺对脑梗死大鼠不同骨骼肌中vimentin及desmin基因的表达,以期进一步探讨针刺治疗脑梗死的机制。

    1 资料与方法

    1.1 动物 雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,体重120 g,清洁级,共100只,由浙江省实验动物中心提供,并在本中心完成动物实验,大鼠生产许可证:SCXK(浙)2014-0001;大鼠使用许可证:SYXK(浙)2014-0008,实验前适应性喂养1周,饲养于温度18～26℃、湿度55%的环境中,自然光照。对动物的各项处理方式均按当地动物管理委员会相关伦理学规定进行。

    1.2 主要试剂 Trizol柱纯化总RNA试剂盒(simgen)、Fast 1st strand cDNA Synthesis Kit(with gDNase)(simgen)、2×SYBR Green PCR Mix(simgen)、50×ROX Reference Dye(simgen) ......