苦碟子注射液的体外细胞毒性研究(2)
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仪器：CKX41-A32PH型倒置显微镜(OLYMPUS)；311型二氧化碳培养箱(Thermo)；680型多功能酶标仪(伯乐)；GSP-9080MBE型隔水式恒温培养箱(上海)；YXQ-LS型立式压力蒸汽灭菌器(上海)；995型超低温冰箱(Thermo)；MH-2型微量振荡器(其林贝尔)等。
实验方法：①细胞培养：细胞采用含10%新生牛血清的DMEM培养液(青霉素、链霉素各100U/ml)，培养于37℃，饱和湿度，5% CO2培养箱中。当细胞生长铺满约90%培养瓶底面积时进行传代，传代比例1∶6，2天传代1次。②MTT法检测各苦碟子注射液对L929细胞活力的影响：取处于对数生长期的L929细胞按2×104/ml，每孔100μl接种于96孔板，依次设空白对照、阳性对照药物以及不同浓度苦碟子注射液组，每组设5个副孔。培养24小时后，空白对照组加入100μl DMEM基础培养液、阳性对照药物组加入100μl 10%的DMSO溶液、苦碟子注射液组加入等体积的不同浓度苦碟子注射液，使其终浓度分别为15.63μl/ml，23.44μl/ml，35.16μl/ml，52.73μl/ml，79.10μl/ml。轻轻晃动混匀，于37℃、5% CO2培养箱中培养72小时后，置显微镜下观察细胞形态并照相记录，MTT法检测细胞活力。抑制率(%)=[(空白对照OD490-调零孔OD490)-(供试品组OD490-调零孔OD490)]/(空白对照OD490-调零孔OD490)×100%、相对增殖率(RGR)=100%-抑制率。③细胞毒性级别判定：根据《中华人民共和国国家标准GB/T14233.2-2005》细胞毒性级别标准，判定毒性级别 ......
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