阿托伐他汀对血管平滑肌细胞中转染的TNF-α启动子活性影响的研究(2)
 |
实验方法：①细胞培养：大鼠平滑肌细胞培养采用组织块贴壁法，雄性SD大鼠，购自徐州医学院主校区动物房，体重150～200 g，水合氯醛经腹腔注射麻醉后，无菌状态取出胸主动脉，7～10天后待原代培养VSMCs长成“峰-谷”样形态后，收获并进行传代培养，实验采用第五代细胞。所有细胞均在含10% FBS的DMEM，5%CO2 37℃培养箱中培养。②Western Blot检测：阿托伐他汀对血管平滑肌细胞中TNF-α基因的表达的影响采用Western Blot检测。实验分为空白组、AngⅡ刺激组、AngⅡ+10μmol/L Atv组、AngⅡ+1μmol/L Atv组、AngⅡ+ 0.1μmol/L Atv组。作用24小时后，按照试剂盒操作步骤提取细胞总蛋白，根据BCA蛋白检测试剂盒步骤进行蛋白浓度测定。进行SDS-PAGE，用特异性抗TNF-α抗体进行免疫杂交检测，β-actin作为内参照，化学发光剂显色，最后对目的条带进行扫描机密度分析。每组重复3次。③质粒酶切电泳：验证其是否为含有人类TNF-α基因启动子的以虫荧光素酶(Luciferase)为报告基因的质粒DNA ......
您现在查看是摘要页，全文长 4010 字符。