缬沙坦对兔颈动脉球囊损伤后血管内膜增生的影响观察与分析
摘要 目的：探讨缬沙坦对兔颈动脉球囊损伤后血管内膜增生的影响。方法：选择健康雄性大耳白兔42只，随机分为假手术组、对照组和缬沙坦组。以放射免疫方法对比3组的ET1、TXB2、6-keto-PCF1a，以制作弹力纤维染色、HE切片及PNCA免疫学组织分析对比3组的PNCA指数、内膜厚度、内膜截面积、管腔狭窄度。结果：对照组的ET1、TXB2最高，缬沙坦组次之，假手术组最低；缬沙坦组6-keto-PCF1a最高，假手术组次之，对照组最低；对照组的PNCA最高，缬沙坦组次之，假手术组最低；缬沙坦组的内膜厚度、内膜截面积、管腔狭窄度与PNCA均低于对照组(P<0.05)。结论：缬沙坦对ET1、TXB2均有抑制作用，对于球囊损伤后平滑肌细胞的增殖有抑制作用。
关键词 缬沙坦；球囊损伤；内膜增生
TOLL样受体4(TLR4)是一种天然免疫系统的细胞跨膜受体，细胞增殖、分化、凋亡等多种生物学过程中均有其的参与。缬沙坦有降压之功效，还可改善心血管重构、抗炎、保护血管内皮。资料表明，缬沙坦可阻断TLR4信号的转导，从而减轻/逆转靶器官的损伤。本研究建立兔颈动脉球囊损伤模型，以观察缬沙坦对血管增生后内膜增生的影响，现报告如下。
资料与方法
选择健康雄性大耳白兔42只，体重2.0～2.5kg，将其随机分为假手术组、对照组和缬沙坦组，每组14只。所有家兔均予5%戊巴比妥钠麻醉(静注，30mg/kg)，对照组与缬沙坦组行右颈动脉总动脉内膜剥脱术(Clowes法，3.6F球囊导管)，假手术组仅将右颈动脉结扎。手术前2d到手术后2周将0.2mg/mL缬沙坦按10mg/(kg·d)给予缬沙坦组。
方法：各组动物术后2周取耳缘静脉血液，分离血浆，采用放射免疫方法分析血浆内皮素(ET1)、血栓素(TXB2)以及6-酮-前列腺素1a(6-keto-PCF1a)。具体操作按照免疫试剂盒说明书进行；常规取材，制作光镜标本，进行弹力纤维染色、HE以及PNCA(增殖细胞核抗原，棕色颗粒状)的免疫组织化学分析。具体按照PNCA试剂盒操作方法进行免疫组化SABC法分析。对阳性PNCA于细胞核内进行定位，以SEM-IPS图形分析系统分析血管增殖指数：总核面积中阳性核比率×平均光密度×100。在SEM-IPS图形分析系统中，HE与弹力纤维染色切片分别用于测量动脉内膜厚度与内弹力膜以下面积(表示原管腔面积)及狭窄管腔截面面积，管腔狭窄度=[(1-狭窄管腔截面面积)/原管腔面积)]。
统计学处理：使用SPSS 19.0软件进行统计学分析。计量数据以(x±s)表示，采用q检验进行差异性分析，以P<0.05认为差异有统计学意义。
结果
缬沙坦对血浆ET1、TXB2、6-keto-PCF1a的影响：①假手术组与对照组比较，ET1、TXB2均明显低，6-keto-PCF1a明显高，P<0.01；②假手术组与缬沙坦组比较，TXB2与6-keto-PCF1a均显著低，P<0.05；③缬沙坦组与对照组比较，ET1、TXB2均明显低，P<0.01。3组比较，对照组的ET1、TXB2最高，缬沙坦组次之，假手术组最低。缬沙坦组6-keto-PCF1a最高，假手术组次之，对照组最低，见表1。
缬沙坦对血浆ET1、TXB2、6-keto-PCF1a的影响：①假手术组与对照组比较，PCNA明显低，P<0.01；②假手术组与缬沙坦组比较，PCNA明显低，P<0.01；③缬沙坦组与对照组比较，内膜厚度、内膜截面积与PNCA均明显低，P<0.01。管腔狭窄度显著低，P<0.05。3组比较，对照组的PNCA最高，缬沙坦组次之，假手术组最低。见表2。
讨论
内皮素(ET1)是体内缩血管最强的活性肽，生长因子样活性较强，可通过自分泌或旁分泌等方式促进血管平滑肌细胞的增生。实验2周后，对照组的ET1显著高于假手术组，表明血管球囊损伤后ET1升高；缬沙坦组的ET1低于对照组，表明缬沙坦抑制了ET1的升高；缬沙坦组的TXB2低于对照组，这是因为缬沙坦刺激前列腺素2的合成，从而降低TXB2；PCNA是一种棕色颗粒状的核内增殖细胞核抗原，与细胞增殖有关。本研究对照组的PCNA指数明显高于假手术，说明动脉球囊损伤后平滑肌细胞增殖较活跃。而缬沙坦组的PCNA低于对照组，说明缬沙坦对于平滑肌细胞增殖有抑制作用。 (刘壮 王文明 陈刚 李乃选)
关键词 缬沙坦；球囊损伤；内膜增生
TOLL样受体4(TLR4)是一种天然免疫系统的细胞跨膜受体，细胞增殖、分化、凋亡等多种生物学过程中均有其的参与。缬沙坦有降压之功效，还可改善心血管重构、抗炎、保护血管内皮。资料表明，缬沙坦可阻断TLR4信号的转导，从而减轻/逆转靶器官的损伤。本研究建立兔颈动脉球囊损伤模型，以观察缬沙坦对血管增生后内膜增生的影响，现报告如下。
资料与方法
选择健康雄性大耳白兔42只，体重2.0～2.5kg，将其随机分为假手术组、对照组和缬沙坦组，每组14只。所有家兔均予5%戊巴比妥钠麻醉(静注，30mg/kg)，对照组与缬沙坦组行右颈动脉总动脉内膜剥脱术(Clowes法，3.6F球囊导管)，假手术组仅将右颈动脉结扎。手术前2d到手术后2周将0.2mg/mL缬沙坦按10mg/(kg·d)给予缬沙坦组。
方法：各组动物术后2周取耳缘静脉血液，分离血浆，采用放射免疫方法分析血浆内皮素(ET1)、血栓素(TXB2)以及6-酮-前列腺素1a(6-keto-PCF1a)。具体操作按照免疫试剂盒说明书进行；常规取材，制作光镜标本，进行弹力纤维染色、HE以及PNCA(增殖细胞核抗原，棕色颗粒状)的免疫组织化学分析。具体按照PNCA试剂盒操作方法进行免疫组化SABC法分析。对阳性PNCA于细胞核内进行定位，以SEM-IPS图形分析系统分析血管增殖指数：总核面积中阳性核比率×平均光密度×100。在SEM-IPS图形分析系统中，HE与弹力纤维染色切片分别用于测量动脉内膜厚度与内弹力膜以下面积(表示原管腔面积)及狭窄管腔截面面积，管腔狭窄度=[(1-狭窄管腔截面面积)/原管腔面积)]。
统计学处理：使用SPSS 19.0软件进行统计学分析。计量数据以(x±s)表示，采用q检验进行差异性分析，以P<0.05认为差异有统计学意义。
结果
缬沙坦对血浆ET1、TXB2、6-keto-PCF1a的影响：①假手术组与对照组比较，ET1、TXB2均明显低，6-keto-PCF1a明显高，P<0.01；②假手术组与缬沙坦组比较，TXB2与6-keto-PCF1a均显著低，P<0.05；③缬沙坦组与对照组比较，ET1、TXB2均明显低，P<0.01。3组比较，对照组的ET1、TXB2最高，缬沙坦组次之，假手术组最低。缬沙坦组6-keto-PCF1a最高，假手术组次之，对照组最低，见表1。
缬沙坦对血浆ET1、TXB2、6-keto-PCF1a的影响：①假手术组与对照组比较，PCNA明显低，P<0.01；②假手术组与缬沙坦组比较，PCNA明显低，P<0.01；③缬沙坦组与对照组比较，内膜厚度、内膜截面积与PNCA均明显低，P<0.01。管腔狭窄度显著低，P<0.05。3组比较，对照组的PNCA最高，缬沙坦组次之，假手术组最低。见表2。
讨论
内皮素(ET1)是体内缩血管最强的活性肽，生长因子样活性较强，可通过自分泌或旁分泌等方式促进血管平滑肌细胞的增生。实验2周后，对照组的ET1显著高于假手术组，表明血管球囊损伤后ET1升高；缬沙坦组的ET1低于对照组，表明缬沙坦抑制了ET1的升高；缬沙坦组的TXB2低于对照组，这是因为缬沙坦刺激前列腺素2的合成，从而降低TXB2；PCNA是一种棕色颗粒状的核内增殖细胞核抗原，与细胞增殖有关。本研究对照组的PCNA指数明显高于假手术，说明动脉球囊损伤后平滑肌细胞增殖较活跃。而缬沙坦组的PCNA低于对照组，说明缬沙坦对于平滑肌细胞增殖有抑制作用。 (刘壮 王文明 陈刚 李乃选)