SA11株轮状病毒VP7基因的克隆及表达
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王忠泽 荫俊 侯晓军 宋伟 张松乐 王剑 北京微生物流行病研究所 北京微生物流行病研究所 北京微生物流行病研究所 北京微生物流行病研究所 北京微生物流行病研究所 张家口医学院
【摘要】采用RT PCR方法 ,从提取的SA1 1株轮状病毒总RNA中扩增出VP7基因片段 ,进行鉴定后 ,将该片段克隆于真核表达载体pEF1 HisC dhfr,构建成重组质粒pEF1 HisC dhfr VP7,然后用质脂体法转染COS 7细胞 ,进行真核系统的表达 .获得了长 981bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知VP7序列相同 .表达后经细胞超声破碎 ,Westernblot检测表达产物 ,在相对分子质量 38× 1 0 3 处有表达条带 ,表达蛋白主要存在于上清中 .因此 ,获得了VP7基因 ,并在COS 7细胞中获得了表达 ,表达蛋白质免疫Balb c小鼠 ,获得了具有特异性结合
【关键词】 轮状病毒 基因克隆 基因表达
【基金】国家新药基金资助项目 ( 96 90 1 0 5 16 5 )
【分类号】Q786
轮状病毒是一种严重危害人类健康的病毒 ,在世界范围内 ,被认为是婴幼儿腹泻的最重要的病原 .VP7是轮状病毒的外壳蛋白的主要成分 ,占病毒蛋白的 3 0 % ,是主要的中和抗原和型特异性抗原[1] .所以研究编码此蛋白的基因 (VP7基因 )对于了解VP7蛋白的生物学活性 ,探讨轮
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摘 要：采用RT-PCR方法，从提取的SAll株轮状病毒总m4A中扩增出VN基因片段，进行鉴定后，将该片段克隆于真核表达载体pEF1/HisC-dhfr，构建成重组质粒pEF1/HisC—dhfr/VP7，然后用质脂体法转染COS-7细胞，进行真核系统的表达.获得了长981bp的PCR片段，序列分析结果与已知VP7序列相同.表达后经细胞超声破碎，Westem b1ot检测表达产物，在相对分子质量38x1旷处有表达条带，表达蛋白主要存在于上清中.因此，获得了V刃基因，并在COS-7细胞中获得了表达，表达蛋白质免疫Balb/c小鼠，获得了具有特异性结合活性的抗体.
关键词：轮状病毒；基因克隆；基因表达
中图分类号：Q786
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2002)03—0235-04
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