利用套叠PCR技术改造酵母表达载体pAO815的研究
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周鹏 郭安平 黎小瑛 中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室 中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室 中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室
【摘要】利用套叠PCR技术将α factor信号肽基因插入pAO815之EcoRⅠ位点,构建成分泌型表达载体pAO815α A.在不改变原克隆位点EcoRⅠ的条件下,借助pAO815之第873位的HindⅢ位点,将pAO815AOX1启动子873 940片段连同α factor信号肽基因序列(246bp)插入pAO815之HindⅢ EcoRⅠ之间,构建成含α factor信号肽基因的分泌型表达载体pAO815α A.
【关键词】 套叠PCR 酵母表达载体pAO 分泌型表达载体
【基金】国家自然科学基金资助项目(30060033)
【分类号】Q78
甲醇毕赤氏酵母(Pichiapastoris)是近年来发展起来的颇有应用前途的真核表达系统,其一般利用单拷贝或低拷贝数整合的YIP型载体,有研究报道,在载体中引入重复序列可提高YIP型载体的整合拷贝数,外源基因能得到“超表达”[1～3].pAO815是用于构建高
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摘 要：利用套叠PCR技术将α-factor信号肽基因插入pAO815之EcoR工位点，构建成分泌型表达载体pA08150—A.在不改变原克隆位点EcoR I的条件下，借助pA0815之第873位的Hind Ⅲ位点，将pAO815 AOXl启动子873-940片段连同α-factor信号肽基因序列(246bp)插入pAO815之HindⅢ/EcoR I之间，构建成含α-factor信号肽基因的分泌型表达载体pAO815α-A.
关键词：套叠PCR；酵母表达载体pA佃15；分泌型表达载体
中图分类号：Q781
文献标识码：A
文章编号：1007--7847(2002)04-0310-04
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