sIL-16在大肠杆菌中的表达及活性分析
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巩艳 叶治家 甘立霞 何凤田 曹廷兵 彭家和 第三军医大学生物化学与分子生物学教研室 第三军医大学生物化学与分子生物学教研室 第三军医大学生物化学与分子生物学教研室 第三军医大学生物化学与分子生物学教研室 第三军医大学生物化学与分子生物学教研室 第三军医大学生物化学与分子生物学教研室
【摘要】用PCR法扩增本室保存的sIL 16cDNA片段,插入含T7启动子的表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET sIL16,转化大肠杆菌BL21(DE3),低温经IPTG诱导蛋白表达,过Ni2+螯和层析柱一步纯化表达蛋白,重组蛋白与Jurkat细胞共同孵育后,观察它对细胞表面IL 2R表达的影响,结果发现IPTG诱导蛋白表达后,经SDS PAGE电泳,可以看到在18kD左右出现明显蛋白表达条带,表达量占菌体可溶蛋白的40%左右,纯化蛋白的纯度达90%以上,经重组蛋白处理过的Jurkat细胞表面IL 2R的表达水平比未经它处理的细胞增高了18.54%.
【关键词】 sIL- 表达 纯化 活性
【基金】全军九五卫生基金(96L031) 重庆市攻关项目(97043)
【分类号】R392.11
白细胞介素16(interkeukin 16,IL 16),又名淋巴细胞趋化因子(kymphocytechromataxisfactor,LCF),是1982年由Cruikshank实验室从抗原刺激的单核细胞中分离提纯的[1].IL 16前体主要来源于外周血单核细胞,由631个氨
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摘 要：用PCR法扩增本室保存的sILl6cDNA片段，插入含T7启动子的表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET—sILl6，转化大肠杆菌B121(DE3)，低温经IPTC诱导蛋白表达，过Ni2+螯和层析柱一步纯化表达蛋白，重组蛋白与Jurkat细胞共同孵育后，观察它对细胞表面IL2R表达的影响，结果发现IPIG诱导蛋白表达后，经SDS—PACK电泳，可以看到在18kD左右出现明显蛋白表达条带，表达量占菌体可溶蛋白的40%左右，纯化蛋白的纯度达90%以上，经重组蛋白处理过的Jwlcat细胞表面IL-2R的表达水平比未经它处理的细胞增高了18.54%.
关键词：sIL-l6；表达；纯化；活性
中图分类号：R392.11
文献标识码：A
文章编号：1007—7847(2002)04—0318—04
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