人β防御素3在大肠杆菌中可溶性表达及其生物活性的鉴定
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黄蓬亮 赵亚华 许少鹏 华南农业大学生命科学学院 华南农业大学生命科学学院 华南农业大学生命科学学院
【摘要】根据大肠杆菌对精氨酸密码子使用的偏好,设计引物并通过酶促法合成了人β防御素3(hBD-3)全基因序列,克隆进pGEX-4T-2中构建pGEX-4T-2-hBD-3融合表达载体.将表达载体转化E.coli宿主菌DH5α,进行IPTG诱导表达.控制诱导条件,提高可溶性蛋白的表达量.将菌体进行反复冻溶使细胞膜穿孔,释放可溶性蛋白.融合蛋白GST-hBD-3经凝血酶切割得到重组人防御素蛋白.用琼脂孔穴扩散抑菌法检测表明,重组人β防御素3对金黄色葡萄球菌有抑菌活性.
【关键词】 hBD- 融合表达 反复冻融
【基金】广东省自然科学基金资助项目(980174)
【分类号】TQ464
防御素是一种阳离子抗菌肽,最初从兔肺的巨噬细胞中发现,由29～54个氨基酸组成,分子内含有3对二硫键.防御素在动植物界中分布广泛,目前已发现了10种人类防御素,根据其来源及分子内二硫键的连接方式不同,将其分为α防御素和β防御素两大类.其中β防御素主要存在于人的粘膜,呼
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摘 要：根据大肠杆菌对精氨酸密码子使用的偏好，设计引物开通过酶促法合成了人β防御素3(hBD-3)全基因序列，克隆进PCEX—4T—2中构建PCEX—4T—2—hBD—3融合表达载体.将表达载体转化E.coli宿主菌DH50，进行IPrC诱导表达.控制诱导条件，提高可溶性蛋白的表达量.将菌体进行反复冻溶使细胞膜穿孔，释放可溶性蛋白.融合蛋白CST—hBD—3经凝血酶切割得到重组人防御素蛋白.用琼脂孔穴扩散抑菌法检测表明，重组人β防御素3对金黄色葡萄球菌有抑菌活性.
关键词：hBD—3；融合表达：反复冻融
中图分类号：Q786
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2005)02—0129—05
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