nm23-H1基因转染L9981肺癌细胞前后基因表达谱的变化
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摘 要：应用基因芯片检测L9981细胞转染nm23-H1基因前后细胞基因表达谱的改变。提取L9981细胞转染nm23-H1基因前后细胞的总RNA，纯化为mRNA后再转录为cDNA。cDNA经限制性内切酶Sau3AI消化后，cDNA片段分别用cy3和cy5标记， 与定制的包含14000个基因芯片杂交。杂交结果经扫描和软件分析，nm23-H1基因转染L9981细胞后发现1156(8.26%，1156/14 000)个基因表达上调，而642(4.59%，642/14000)个基因表达下调。涉及基因包括信号传导、癌基因与抑癌基因、转移相关基因、细胞周期与凋亡、细胞外基质与细胞骨架相关基因， 以及细胞因子和转录因子等。nm23-H1基因是通过对转移相关基因的调节来发挥其抑制肺癌细胞株L9981侵袭和转移作用的。
关键词：L9981；基因芯片；基因表达；nm23-H1基因
中图分类号：R734.2；Q813.1
文献标识码：A
文章编号：1007—7847(2006)01—0077—05
nm23-H1基因已被证明是肿瘤转移抑制基因。将nm23-H1基因的cDNA转入nm23-H1基因表达缺失的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981，可以逆转其恶性表型。但是nm23-H1抑制肺癌侵袭与转移的分子机制尚不十分清楚，我们以往的研究表明，nm23-H1基因抑制肿瘤侵袭与转移可能是通过对转移相关基因的调控实现的，为进一步研究nm23-H1作用的分子机制，我们应用基因芯片检测了nm23-Hl转染L9981前后相关基因表达的变化。
1 材料与方法
1.1 材料
l，1.1 细胞株
1)L9981(高转移大细胞肺癌细胞株)；2)L9981-nm23-H1(稳定表达nm23-H1基因的L9981细胞株)。均由四川大学华西医院四川省肺癌分子重点实验室提供。
1.1.2 常用试剂及设备
精制小牛血清和RPMI t640培养基购自Hy-clone公司；用120mmol/L的NaOH溶液配成lmmol/L的贮备液，4℃贮存。SuperScriptTM IIRNase H- Reverse Transcriptase(1nvitrogenCat.No.18064-014)，dATP、dGTP、dCTP、dTYPOligod(T) Primer(Bioasia合成)，Cy5(Amersham，Cat，No.PA55021)，Cy3(Amersham，Cat.No.PA53021)， RNA inhibito(Takara，Cat.No.D2311A)，OlAquick Nucleotide RemovalKit(OIAGEN，Cat，No.28306)Genemachine：型号OmniGrid 100Pixsys5500芯片打印仅购自Carte—sian公司 ......
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