应用小鼠整体原位杂交技术检测MDM2在鼠胚发育不同阶段的表达(2)

http://www.100md.com 2006年6月1日 周　文　冯湘玲　李　虹　王　磊　任彩萍　姚开泰

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     100mg/LHeparin)60℃水浴3次，每次1h；换含约1mg/LMDM2RNA探针的杂交液(成份同预杂交液)1mL；65℃杂交过夜。

    1.2.5 终止杂交，抗体孵育和显色

    用预热的杂交液65℃漂洗30min；预热的溶液1(50% frmamide/1XSSC/0.1%Tween 20新鲜配制)漂洗2次，每次1h；溶液1/MABT按1：1的比例(含100mmol/L maleic acid，150mmol/LNacl，0.1% Tween20)室温漂洗30min；MABT漂洗4次，每次30min；MABT/2%BBR室温漂洗1h；2mL新鲜MABT/2%BBR/20%封闭用绵羊血清，室温孵育1h；MABT/2%BBR/20%封闭用绵羊血清/抗地高辛抗体，4℃孵育过夜，E7-9的抗体滴度为1/2000，E10为1/5000。

    1.2.6 终止显色，固定照相

    依次以MABT(含100 mmol/L maleic acid，150mmol/LNaCl，0.1%Tween 20)漂洗10次，前4次15 min，后4次30min，最后二次1h，碱性磷酸酶溶液(100mmol/LTrispH 9.5，50mmol/LMgCl2，100 mmol/L NaCl，0.1%Tween 20，5mmol/L左旋咪唑)漂洗3次(室温) ......

    http://www.100md.com/html/paper/1007-7847/2006/02/02-1.htm

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