应用小鼠整体原位杂交技术检测MDM2在鼠胚发育不同阶段的表达(1)
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摘 要：整体原位杂交(whole-mount in situ hybridization，WMH)已经成为基因表达定位和表达分布模式研究的一种重要手段。该技术能在整体水平上精确地研究胚胎发育过程中基因表达的三维信息，而且为大规模筛选区域及组织特异性候选克隆提供了有利的技术手段。采用体外转录地高辛标记的RNA探针，检测已知基因MDM2在鼠胚胎发育不同阶段的表达模式。
关键词：整体原位杂交：RNA探针；小鼠；MDM2
中图分类号：Q132.7
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2006)02-0099-04
整体原位杂交作为检测胚胎发育过程中基因表达整体效果的快速、有效手段，已在基因表达的时空顺序和表达谱的建立等多方面得到了广泛的应用。整体原位杂交技术一方面为大规模的筛选区域及组织特异性候选克隆提供了有利的技术手段。随着鼠胚胎早期发育阶段cDNA文库的完善，该技术可大规模的分离胚胎发育中重要的调节子，从而为胚胎形成模式提供了一个重要的新的分子遗传标志库。另一方面为检测某些细胞群在体内的原位转录本，并阐明分化过程中的分子遗传事件提供了帮助。如，鼠胚胎干细胞(ES细胞)为多能干细胞，其分化有助于了解胚胎的正常发育过程，而整体原位杂交技术能检测到其中某些少量的亚类细胞群在基因表达中的重要变化，而这些轻微的异质性是不能用总RNA的方法所能检测到的。此外，两个或多个基因在同一细胞内的共表达或两个基因在相邻细胞中的有序表达，为了解分子信号传导通路提供了一个可靠的切入点。
目前，整体原位杂交在海胆、两栖类等动物胚胎上已有初步尝试。本研究采用体外转录DIG标记的RNA探针，检测已知基因MDM2在鼠胚胎发育不同阶段的表达模式。
1 材料与方法
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