蜂毒素基因的突变与表达及其构效关系研究
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赵亚华 白云 崔红 廖富蘋 高向阳 华南农业大学生命科学学院 华南农业大学生命科学学院 华南农业大学生命科学学院 华南农业大学生命科学学院 华南农业大学生命科学学院
【摘要】为获得保留有抗菌活性而降低溶血活性作用的蜂毒素,对其分子结构进行了改造.其中一条序列缺失Lys-7,另一条缺失Leu-9.用PCR技术获得两条新的蜂毒素基因,将其克隆到酵母表达载体pPICZα-A,获得重组质粒pPICZα-A-Mel1和pPICZα-A-Mel2.将2个重组质粒分别转化毕赤酵母菌GS115.筛选获得重组酵母菌.对重组酵母菌培养条件进行优化,在YEPD中含甘油2%,pH为7,重组酵母菌培养48h后,0.5%的甲醇诱导72h,表达目的蛋白通过Tricion-SDS-PAGE确定分子质量为5.4kD.杀菌效价分别达0.947、1.085.结果表明两条蜂毒素基因成功的在毕赤酵母中表达,经突变后表达的蜂毒素降低了溶血活性,同时保留了抗菌活性.
【关键词】 蜂毒素 毕赤酵母 培养条件 抗菌活性 溶血活性
【基金】国家自然科学基金资助项目(30570036)
【分类号】Q78
蜂毒素(m elittin)是意大利蜜蜂(Apism ellifi-cera)蜂毒的主要成分之一,由26个氨基酸残基组成,序列为:GIGAVLKVLTTGLPALIS W IKRKRQQ,相对分子质量2840,约占蜂毒干重的50%左右.蜂毒素对20余种革兰氏阳性和阴性细菌等病原微生物的生长繁殖有抑制作用,并能增强磺胺类和青霉素
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摘要：为获得保留有抗菌活性而降低溶血活性作用的蜂毒素，对其分子结构进行了改造。其中一条序列缺失Lys·7，另一条缺失Ieu·9。用PCR技术获得两条新的蜂毒素基因，将其克隆到酵母表达载体pPICzα-A，获得重组质粒pPICZα—A-Me1 1和pPICZα-A-Me1 2。将2个重组质粒分别转化毕赤酵母菌CSll5。筛选获得重组酵母菌。对重组酵母菌培养条件进行优化，在YEPD中含甘油2%，pH为7，重组酵母菌培养48 h后，0.5%的甲醇诱导72h，表达目的蛋白通过Tricion-SDS-PAGE确定分子质量为5.4 kD。杀菌效价分别达0.947、1.085。结果表明两条蜂毒素基因成功的在毕赤酵母中表达，经突变后表达的蜂毒素降低了溶血活性，同时保留了抗菌活性。
关键词：蜂毒素；毕赤酵母；培养条件；抗菌活性；溶血活性
中图分类号：Q786
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2006)04-0313-07
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