CYP3A4基因原核表达质粒构建与诱导表达(1)

http://www.100md.com 2007年3月1日 张　宝　霍　霞　齐宗利　徐锡金　李　燕　林　懿　彭　琳

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     摘 要：以质粒pCWNF14为模板，采用PCR技术扩增出CYP3A4基因，并将其接入pET-22b(+)、pET-28b(+)和pET-32a(+)载体中，经PCR测序鉴定后，转化Rosetta(DE3)2pLysS细菌，并用IPTG诱导表达，采用考马斯亮蓝染色的方法检测重组蛋白表达，3个表达重组质粒中，只有pET-32a(+)-CYP3A4可以表达目的蛋白；在低浓度IPTG(50μmol/L)诱导6h，所表达的CYP3A4蛋白约占细菌总蛋白的40%，且该蛋白不溶于8mol/L的尿素，而溶于去污剂10mmol/L 3-((3-cholamidopropyl)dimethylammonio propanesulfonic acid(CHAPS))和0.3%lauroyl sarcosine(SKL)，成功地使CYP3A4基因在原核系统中高效表达。

    关键词：CYP3A4；大肠肝菌；表达

    中图分类号：Q75

    文献标识码：A

    文章编号：1007.7847(2007)01.0028-05

    CYP450蛋白是一类含血红素酶，它负责催化多种外源、内源性化合物的生物转化，例如：药物、致癌物等^[1，2]，临床上大多数药物都需经CYP450代谢，所以一些候选药物在临床前需经CYP450代谢检测，尤其是近年来，新药的不断出现以及两种或两种以上药物同时应用对疗效的影响越来越受到重视，迫切需要应用体外系统能够快速、高通量检测对CYP450酶活性的影响，因此重组蛋白CYP450在药物代谢研究中具有重要的价值 ......

    http://www.100md.com/html/paper/1007-7847/2007/01/06.htm

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