均匀设计优化建兰ISSR-PCR体系(2)
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参见附件(577KB，6页)。
聚合酶购自TaKaRa公司。
2 结果与分析
2.1 ISSR-PCR体系的均匀优化
第1轮4因素5水平均匀设计共20个处理组合的ISSR-PCR体系的扩增结果见图1.从图1可以看出，不同因素水平组合的ISSR-PCR体系的扩增结果差异显著：组合1和9没有扩增，组合4和18有少量扩增产物，但无法辨识；组合2和15扩增带谱弥散，难以区分；组合7、8和19扩增带谱强，但有拖带现象，辨识困难；组合5、6、13、14、16、17和20扩增带谱少，其中组合5和6带谱也很弱；综合扩增带谱的数目、强弱、清晰度和可分辨率等指标，组合11是比较理想的模式，因此，初选组合11(20μL反应体系中，含Mg2+1.5mmol/L，dNTP 0.2mmol/L，引物0.5μmol/L，Taq DNA聚合酶lU，模板DNA 40ng)作为第1轮均匀设计优化的结果。
为获得理想的ISSR-PCR体系，在组合11对应的因素水平基础上，进行第2轮均匀设计筛选，图2为第2轮4因素3水平均匀设计共12个处理组合的ISSR-PCR体系的扩增结果，由图2知，12个组合中，组合3、4、8和12扩增带谱少且弱，效果差；组合1和2扩增带谱数较多，强弱较均匀且清晰可辨，是比较理想的扩增模式，相比而言，组合2较组合1，带谱强弱差异更小、明晰可辩 ......
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