均匀设计优化建兰ISSR-PCR体系(1)

http://www.100md.com 2007年3月1日 胡　薇　黄儒珠　孙　端　饶春荣　李锦凤

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     摘 要：采用均匀设计，对影响建兰ISSR—PCR体系的引物、Mg²⁺、dNTP和Taq DNA聚合酶浓度等进行4因素5水平和4因素3水平两轮优化，建立了适合于建兰ISSR-PCR的反应体系：在20μL反应体系中，含引物0.25tLmol/L、Mg²⁺2.5mmol/L，dNTP 0.2mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U和模板DNA 40ng.在此基础上对扩增程序中的循环次数和退火温度，以及ISSR引物进行筛选，筛选获得的扩增程序为：94℃预变性5min；接着进行32个循环：94℃变性35s，52-56℃退火45s，72℃延伸90s；循环结束后，72℃延伸10min.同时筛选得到14个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物。

    关键词：建兰；ISSR—PCR；均匀设计

    中图分类号：Q949.662

    文献标识码：A

    文章编号：1007-7847(2007)01-0058-06

    建兰(Cymbidium ensifolium(Linn.)Sw.)为兰科(Drchidaceae)兰属(Cymbidium)植物，极具观赏和经济价值，兰科植物广泛分布于各种生态环境，表现有高度特异的形态、结构和生理特性，建兰也不例外，长期的自然杂交以及人工选育，品种间存在很高的遗传分化和种间类型，这为杂交育种选配亲本提供了丰富的种质资源；但同时，仅凭花色、花型、叶色、叶型、花梗等传统的形态指标来辩识品种，则存在很大难度，这不仅给品种的整理和研究带来困难，同时也影响新品种的注册登录和产权保护。

    以DNA指纹图谱为指标的分子标记技术，标记的位点数远大于形态标记和生化标记，且不易受环境因素的影响，可弥补或解决形态标记和生化标记中的缺陷或难题，因此，被广泛用于植物品种的鉴定 ......

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