RNA干扰VEGF对体外JAR细胞生长的影响(2)

http://www.100md.com 2007年3月1日 黄向红　伍招娣　谭小军

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    参见附件(613KB，6页)。

     经感受态大肠杆菌DH5a克隆扩增，提取质粒备用。

    1.2.3 JAR细胞的分组

    组1：空白对照(未转染JAR细胞)组；组2：转染空pSUPER载体的细胞组；组3：转染含shVEGF1片段的pSUPER载体细胞组；组4：转染含shVEGF2片段的pSUPER载体细胞组。

    1.2.4 阳离子脂质体法转染细胞

    转染前24h将JAR细胞按2×105接种于6孔板中培养，待细胞生长至约80%融合度时弃培养基，用不含血清的RPMI-1640液洗涤细胞2次，在微量离心管中准备A1、A2、A3、B1、B2及B3液，A1、A2、A3液均为：250μL RPMI-1640液+5μLlipofectamine^TM 2000；B1液：250μL RPMI-1640液+3μg空载体质粒；B2液：250μL RPMI-1640液+3μg shVEGF1载体质粒；B3液：250μL RP-MI-1640液+3μg shVEGF2载体质粒，将A1+B1，A2+B2，A3+B3液混合置室温下半小时后，分别加入0.8 mL RPMI-1640液，将A1+B1昆合液均匀滴加在组2细胞表面，A2+B2混合液均匀滴加在组3细胞表面，A3+B3混合液均匀滴加在组4细胞表面，组1细胞表面滴加RPMI-1640液，4组细胞37℃，5%CO²培养箱中培养6h，弃去转染液，换不含抗生素的完全培养液 ......

    http://www.100md.com/html/paper/1007-7847/2007/01/14-1.htm

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