肺癌组织和肿瘤细胞系中BRG1的表达分析(1)
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摘 要：BRGJ(brahma-related gene 1)是进化上高度保守的SWI/SNF染色质重塑复合物的成员之一，研究表明：BRGI具有抑瘤基因的特征，可能与肿瘤的发生发展有关,我们采用RT—PCR、NortherR杂交和Westemblotting证实：肺腺癌细胞系A549和鼻咽癌细胞系HNE2、HNE3、CNE1中无BRG1的表达，而肺鳞癌细胞系NCI—H520、永生化正常人支气管上皮细胞系HBE和鼻咽癌细胞系HONE1、HNE1、CNE2中有BRGJ的表达，同时，通过RT—PCR检测10例肺癌组织标本，发现60%(6/10)的肺癌组织中日BRG1的mRNA水平明显下调，而配对正常肺组织中BRG1，的mRNA表达未见改变,对29例肺癌组织和10例配对正常肺组织切片进行免疫组化染色，结果显示：肺癌组织中BRG1蛋白表达的阳性率为37.9%(11/29)，配对正常肺组织中BRG1蛋白表达的阳性率为90%(9/10)，两者的差异有显著性(P
1.3 方法
1.3.1 RNA抽提及Northern杂交
细胞/组织RNA按TRIzol试剂操作程序提取。RNA电泳以及Northern杂交均参照文献[14]的方法，探针标记则按试剂盒说明书进行，1.3.2 RT-PCR
cDNA合成：取1μg RNA样品，加1μLoligodT(0.5g/L)，65℃变性10min，冰上骤冷后加10×逆转录缓冲液2μL，25mmol/L MgCl
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