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编号:11608554
链霉菌H03发酵液中具有抗菌活性多糖的分离纯化及其单糖组成分析(2)
http://www.100md.com 2007年9月1日 《生命科学研究》 2007年第3期
链霉菌H03发酵液中具有抗菌活性多糖的分离纯化及其单糖组成分析
链霉菌H03发酵液中具有抗菌活性多糖的分离纯化及其单糖组成分析
链霉菌H03发酵液中具有抗菌活性多糖的分离纯化及其单糖组成分析
链霉菌H03发酵液中具有抗菌活性多糖的分离纯化及其单糖组成分析
链霉菌H03发酵液中具有抗菌活性多糖的分离纯化及其单糖组成分析

     水解2h,真空干燥除去三氟乙酸。

    糖腈乙酸酯衍生物的制备:向除去三氟乙酸的水解物中分别加入10mg盐酸羟胺,0.6mL吡啶,密封后于90℃水浴振荡反应30min,取出冷却至室温,再加入0.9mL乙酸酐反应40min,反应产物直接进行GC-MS分析,另取各标准单糖10mg,按上述条件衍生化后进行GC-MS分析,以确定各单糖衍生物在GC-MS分析时的出峰时间和质谱信号,然后比较各单糖衍生物和样品水解物在相同条件下的保留时间和质谱信号就可确定多糖样品的单糖组成。

    2 结果与分析

    2.1 发酵产物分离过程中抗菌活性试验结果(表1)

    活性试验表明,链霉菌发酵液(1)具有抗菌活性,经浓缩后的发酵液(2)抗菌活性更强,用savage法和盐析法得到的沉淀部分即蛋白质(4和5)都没有抗菌活性;而上清液(3和6)仍有抗菌活性;上清液经过ψ36透析袋透析去掉小分子物质后,透析袋内的物质(7和8)具有抗菌活性,当透析袋内的物质用乙醇沉淀后其上清液(9和10)没有抗菌活性而沉淀部分(11和12)具有抗菌活性,最后将沉淀部分用Sephadex G-100进行柱层析处理,主峰对应溶液仍然具有非常强的抗菌活性(13和14);而且抑菌活性随着产物的纯度的增加而增强;随着产物的浓度的增加而增强。

    从上述分离纯化试验和抗菌试验中可以看出,最后得到的具有抑菌活性的物质是一种非蛋白质类的大分子物质,由于ψ36透析袋能透过的物质的最大分子质量为20000Da,所以透析袋内截留下来的物质分子质量大于20000Da,此外,根据所采用的分离纯化方法,可以推断该大分子物质可能是糖类物质,但该大分子物质的具体杀菌机理和准确的分子质量大小有待于进一步的试验说明 ......
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