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编号:11608558
n-6脂肪酸去饱和酶fat-1基因对神经元细胞凋亡的抑制作用(2)
http://www.100md.com 2007年9月1日 《生命科学研究》 2007年第3期
n-6脂肪酸去饱和酶fat-1基因对神经元细胞凋亡的抑制作用
n-6脂肪酸去饱和酶fat-1基因对神经元细胞凋亡的抑制作用
n-6脂肪酸去饱和酶fat-1基因对神经元细胞凋亡的抑制作用
n-6脂肪酸去饱和酶fat-1基因对神经元细胞凋亡的抑制作用
n-6脂肪酸去饱和酶fat-1基因对神经元细胞凋亡的抑制作用

     含钙离子载体(5μmol/L)的PBS缓冲液中保温,10min后条件[生缓冲液陕复,用于二十烷类的测定。

    1.6 数据分析

    细胞生存力(MTT)和二十烷类(前列腺素E2)水平的数据比较采用Student's t-test,所有分析都是每组6孔细胞,并且每一部分实验重复3次,显著性界限值为p<0.05。

    2 结果

    2.1 携带fat-1基因的重组腺病毒载体的构建质粒fat-1cDNA经EcoR V/Kpn I切割后,插入到pAdTrack-CMV载体中,并与腺病毒骨架载体pAdEasy 1进行同源重组,得到重组的腺病毒Ad.GFP.fat1,携带2个基因fat-1和GFP(图1所示为其图谱),另外还得到克隆Ad.GFP(只携带绿荧光蛋白基因GFP,作为报告基因),用作对照病毒,重组腺病毒载体DNA用Pac I和BamH I消化,序列测定进行鉴定,结果都表明该重组载体的结构是正确的(图2)。

    2.2 大鼠皮质神经元中fat-1基因的表达

    转染Ad.GFP.fatl后表达fat-1基因的大鼠皮质神经元细胞,在同时表达GFP后很容易在荧光显微镜下辨别出来(它表现为亮的绿色荧光),转染48h后,30%~40%的神经元转染成功,并表达GFP基因(图4,a,A),fat-1基因的表达情况使用核酸酶保护性分析(ribonuclease protection assay)mRNA显示 ......
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