GAPDH抗体(1:2000)，37℃水平摇床孵育1h，4℃过夜，PBS充分洗涤后分别加入辣根过氧化物酶标记的相应的二抗。即猴抗羊IgG(1:1000)和羊抗鼠IgG(1:1000)，37℃水平摇床孵育2h，充分洗涤后，化学发光试剂(ECL)A液和B液混合后加至硝酸纤维素膜上，暗示曝光3～5min，取出X光片，显影，定影观察结果。

    2 结果与分析

    2.1 PCR扩增血清中I-IBV X基因片断

    以HBV感染者的血清DNA为模板，扩增出HBV X基因片段，琼脂糖凝胶电泳，目的条带出现在500bp左右的位置，与预计的481bp相符，阴性对照组是以正常人血清中提取的DNA为模板，未扩增出目的片断，见图1表明通过PCR方法已从HBV感染者血清中成功扩增出HBV X基因片段，为下一步基因克隆打下了基础。

    2.2 重组质粒pGEM/X阳性克隆的筛选及鉴定

    PCR产物与pGEM-T载体连接，转化感受态细菌，挑选白色菌落，增菌提取质粒，质粒经Apa I/HindⅢ双酶切，酶切产物用1%琼脂糖凝胶电泳，于500bp左右可见一清晰的条带，与预计的481bp相符，表明经PCR扩增的X基因片段已成功克隆人pGEM-T载体中，见图2。

    2.3 重组表达质粒pCMV/X的筛选及鉴定

    重组表达质粒pCMV/X经Apa I/HindⅢ双酶切后，酶切产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳，可见大小两条清晰的条带，小分子条带位于500bp左右，与HBV X基因的大小相符 ......