人Ndfip1和Nedd4的原核表达，纯化和抗体制备
参见附件(455kb)。
黄守均 张勇 菅记涌 朱大海 中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础医学院生化与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室 中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础医学院生化与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室 中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础医学院生化与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室 中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础医学院生化与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室
【摘要】为了进一步从蛋白水平上检测Ndfip1(Nedd4 family interacting protein 1)和Nedd4(Neuronal precursor cell-expressed developmentally down-regulated 4)在肢带型肌营养不良(Limb-girdle muscular dystrophy,LGMD)患者的肌肉组织中的表达及功能,以正常人的脑和肾脏组织的总RNA为模板,RT-PCR扩增Ndfip1和Nedd4部分编码序列,构建原核表达重组质粒pET28b-hNdfip1和pET28b-hNedd4,转化大肠杆菌BL21后,加IPTG诱导蛋白表达,Ni-NTA层析柱纯化蛋白,免疫BALB/c小鼠制备抗体.Westernblot检测显示抗体能识别人和小鼠的Ndfip1和Nedd4,小鼠各组织中Ndfip1的蛋白表达谱与文献报道的Ndfip1 mRNA表达谱不一致,暗示Ndfip1具有转录和翻译水平的调控.
【关键词】 Ndfip Nedd 肢带型肌营养不良 抗体
【基金】国家自然科学基金资助项目(30330430)
【分类号】Q78
Nedd4是一种具有HECT结构域的泛素连接酶,它属于一个在进化中非常保守的蛋白家族.Nedd4蛋白家族中的9个成员具有相似的结构:N端的C2结构域,中间部分2~4个WW结构域和C端的HECT结构域,一般认为C2结构域可介导钙离子依赖的蛋白的细胞膜定位,WW结构域能通过结合某些蛋白质的PPXY
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摘要：为了进一步从蛋白水平上检测Ndfip1(Nedd4 family interacting protein 1)和Nedd4(Neuronal precursorcell-expressed developmentally down-regulated 4)在肢带型肌营养不良(Limb-girdle muscular dystrophy，LGMD)患者的肌肉组织中的表达及功能，以正常人的脑和肾脏组织的总RNA为模板，RT-PCR扩增Ndfip1和Nedd4部分编码序列，构建原核表达重组质粒pET28b-hNdfip1和pET28b-hNedd4，转化大肠杆菌BL21后，加IPTG诱导蛋白表达，Ni-NTA层析柱纯化蛋白，免疫BALB/c小鼠制备抗体，Western blot检测显示抗体能识别人和小鼠的Ndfip1和Nedd4，小鼠各组织中Ndfip1的蛋白表达谱与文献报道的Ndfip1 mRNA表达谱不一致，暗示Ndfip1具有转录和翻译水平的调控。
关键词：Ndfip1；Nedd4；肢带型肌营养不良；抗体
中图分类号：Q78；R392
文献标识码：A
文章编号：1007-07847(2008)01-0040-05
Expression，Purification of hNdfip1 and hNedd4，and the Specific Antibody Preparation
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
黄守均 张勇 菅记涌 朱大海 中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础医学院生化与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室 中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础医学院生化与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室 中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础医学院生化与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室 中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础医学院生化与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室
【摘要】为了进一步从蛋白水平上检测Ndfip1(Nedd4 family interacting protein 1)和Nedd4(Neuronal precursor cell-expressed developmentally down-regulated 4)在肢带型肌营养不良(Limb-girdle muscular dystrophy,LGMD)患者的肌肉组织中的表达及功能,以正常人的脑和肾脏组织的总RNA为模板,RT-PCR扩增Ndfip1和Nedd4部分编码序列,构建原核表达重组质粒pET28b-hNdfip1和pET28b-hNedd4,转化大肠杆菌BL21后,加IPTG诱导蛋白表达,Ni-NTA层析柱纯化蛋白,免疫BALB/c小鼠制备抗体.Westernblot检测显示抗体能识别人和小鼠的Ndfip1和Nedd4,小鼠各组织中Ndfip1的蛋白表达谱与文献报道的Ndfip1 mRNA表达谱不一致,暗示Ndfip1具有转录和翻译水平的调控.
【关键词】 Ndfip Nedd 肢带型肌营养不良 抗体
【基金】国家自然科学基金资助项目(30330430)
【分类号】Q78
Nedd4是一种具有HECT结构域的泛素连接酶,它属于一个在进化中非常保守的蛋白家族.Nedd4蛋白家族中的9个成员具有相似的结构:N端的C2结构域,中间部分2~4个WW结构域和C端的HECT结构域,一般认为C2结构域可介导钙离子依赖的蛋白的细胞膜定位,WW结构域能通过结合某些蛋白质的PPXY
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摘要：为了进一步从蛋白水平上检测Ndfip1(Nedd4 family interacting protein 1)和Nedd4(Neuronal precursorcell-expressed developmentally down-regulated 4)在肢带型肌营养不良(Limb-girdle muscular dystrophy，LGMD)患者的肌肉组织中的表达及功能，以正常人的脑和肾脏组织的总RNA为模板，RT-PCR扩增Ndfip1和Nedd4部分编码序列，构建原核表达重组质粒pET28b-hNdfip1和pET28b-hNedd4，转化大肠杆菌BL21后，加IPTG诱导蛋白表达，Ni-NTA层析柱纯化蛋白，免疫BALB/c小鼠制备抗体，Western blot检测显示抗体能识别人和小鼠的Ndfip1和Nedd4，小鼠各组织中Ndfip1的蛋白表达谱与文献报道的Ndfip1 mRNA表达谱不一致，暗示Ndfip1具有转录和翻译水平的调控。
关键词：Ndfip1；Nedd4；肢带型肌营养不良；抗体
中图分类号：Q78；R392
文献标识码：A
文章编号：1007-07847(2008)01-0040-05
Expression，Purification of hNdfip1 and hNedd4，and the Specific Antibody Preparation
注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文
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