海洋红酵母电转化条件的研究
高效电转化,转化率,感受态细胞,转化子,质粒,转化效率,基因组,培养基
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刘秀莲 王宇光 雷禄旺 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
【摘要】采用电穿孔的方法对海洋红酵母进行外源DNA的转化.通过调整参数,对影响电转化的主要因素进行探索,初步建立了载体pTEF1/Zeo-rDNA对海洋红酵母的高效电转化方法.结果表明,当采用对数生长中期的菌体制备感受态细胞、电压为900V、质粒浓度为20mg/L和0.2cm电转化杯时,转化率达到最大值,为每微克质粒DNA52个转化子.经抽样鉴定所得到的转化子均为阳性克隆.首次建立了以海洋红酵母为宿主的高效电转化体系,为外源基因在海洋红酵母中的表达奠定了基础.
【关键词】 海洋红酵母 高效电转化 转化率 感受态细胞 转化子 质粒 转化条件 转化效率 基因组 培养基
【基金】国家自然科学基金资助项目(30560117)
【分类号】Q78
海洋红酵母Rhodotorula benthica是海洋中自然存在的一种单细胞酵母品系,富含氨基酸、维生素和以虾青素为主的类胡萝卜素等多种营养物质,具有很大的应用潜力[1].目前,国内外关于海洋红酵母的研究工作还主要集中在对其培养条件及发酵工艺的优化方面,而对其遗传修饰方面的研究
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摘要：采用电穿孔的方法对海洋红酵母进行外源DNA的转化。通过调整参数，对影响电转化的主要因素进行探索，初步建立了载体pFF1/Zeo-rDNA对海洋红酵母的高效电转化方法。结果表明，当采用对数生长中期的菌体制备感受态细胞、电压为900V、质粒浓度为20mg/L和0.2cm电转化杯时，转化率达到最大值，为每微克质粒DNA 52个转化子。经抽样鉴定所得到的转化子均为阳性克隆。首次建立了以海洋红酵母为宿主的高效电转化体系，为外源基因在海洋红酵母中的表达奠定了基础。
关键词：海洋红酵母；高效电转化；转化率
中图分类号：Q78
文献标识码：A
文章编号：1007-7847(2008)02-0136-05
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